Ga naar de inhoud
HBL-100 cellen
Weefsel
Borst
Ziekte
Carcinoom
Synoniemen
HBL 100, HBL100

Documenten

HBL-100 cellen

Cell line · Productnummer 300178

HBL-100 is een menselijke borstepitheelcellijn die oorspronkelijk is afgeleid van de moedermelk van een zogende moeder. De melk werd drie dagen na de bevalling afgenomen...

€430.00excl. btw en verzendkosten
Weinig op voorraad
Lot
Aanbevolen (verste partij)
  • CoA
1

01Algemene informatie

Beschrijving

HBL-100 is een menselijke borstepitheelcellijn die oorspronkelijk afkomstig was van de moedermelk van een zogende moeder. De melk werd drie dagen na de bevalling verzameld en ondanks het feit dat de donor geen borstlaesie had en geen familiegeschiedenis van borstkanker, vertoonden de cellen bij passage 7 een abnormaal karyotype. Deze cellijn valt op door zijn vermogen om een kleine hoeveelheid lactose te synthetiseren en te reageren op stimulatie door prolactine of oestrogeen door de productie van caseïne te verhogen. Microscopische analyses, zoals elektronenmicrofoto's, hebben de aanwezigheid van microvilli, tonofibrillen en desmosomen in deze cellen bevestigd, wat hun typische epitheliale kenmerken benadrukt.

De HBL-100 cellijn heeft echter aanzienlijke complicaties ondervonden bij de identificatie en karakterisering. Er werd ontdekt dat de cellijn een Y-chromosoom bevat, wat duidt op een verkeerde identificatie omdat aanvankelijk werd gedacht dat de cellijn van vrouwelijke oorsprong was. Verdere complexiteit komt voort uit de aanwezigheid van SV40-genomische sequenties in de cellijn, wat eerdere opvattingen tegenspreekt dat de cellijn spontaan geïmmortaliseerd was. Deze bevindingen hebben geleid tot discussies over de oorsprong en de genetische samenstelling van HBL-100, waardoor het een problematische cellijn is voor onderzoek zonder grondige validatie van de eigenschappen en oorsprong.

Weefsel
Borst
Ziekte
Carcinoom
Synoniemen
  • HBL 100
  • HBL100

02Classificatie

Organisme
Mens
Seks
Vrouw
Groei-eigenschappen
Aanhanger
Bioveiligheidsniveau
1

03Kenmerken

Morfologie
Epitheelachtig
Tumorverwekkend
Ja, in naakte muizen. Bij een passage lager dan 35 is de lijn niet tumorigeen in naaktmuizen, maar vormt kolonies in zachte agar. Er is gemeld dat de tumorigeniciteit toeneemt boven passage 35.
Ploïdie
Aneuploïde
MSI-status
Stabiel (MSS)
Karyotype
Het aantal stamchromosomen is bijna triploïd met een modaal aantal van 67 chromosomen en de 2S-component komt voor bij 0,6%. De meeste chromosoomaanvullingen bestaan uit ongeveer 39 normale en 28 markerchromosomen. Markers zoals 2q, 11q+, 11q, t(2q.12), t(2q.5q?), t(6p?.16), 16pt en vele andere komen in de meeste metafasen voor. Normale chromosomen 11, 14, 15 en 16 zijn afwezig. 2, 12, 17 en 19 zijn monosomisch en de x is disomisch. DNA-profilering voor amelogenine, een geslachtschromosoomspecifieke PCR-test die x-chromosoomspecifieke producten kan onderscheiden van Y-chromosoomspecifieke producten, onthulde de aanwezigheid van Y-chromosomen in deze cellijn van vermoedelijk vrouwelijke oorsprong. Bevestiging van de algemene bevindingen werd bereikt door QM-kleuring, C-banding en FISH, met een hele chromosoomverf probe naar het menselijke Y-chromosoom.

04Identificatiegegevens

Bronvermelding
HBL-100 (Cytion catalogusnummer 300178)
NCBI-belastingnummer
9606
Cellosaurus
CVCL_4362

05Expressie en vatbaarheid

Antigeenexpressie
HLA A1, A10, A11, B7, B8
Iso-enzymen
G6PD, B, PGM1, 1, PGM3, 2, ES-D, 1, Me-2, 0, GLO-1, 2, AK-1, 1-2, Fenotype Frequentie Product: 0.0008
Virussen
De cellen bevatten een tamelijk geïntegreerd SV40-genoom en er is gemeld dat ze een type D retrovirus kunnen bevatten dat lijkt op of identiek is aan het Mason-Pfizer apenvirus (MPMV).
Reverse transcriptase
Positief

06Behandeling en kweek

Kweekmedium
McCoys 5a, w: 3,0 g/L Glucose, w: stabiel Glutamine, w: 2,0 mM Natriumpyruvaat, w: 2,2 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820200a)
Incubatieomgeving

37°C, 5%CO2, bevochtigde atmosfeer.

Supplementen
Vul het medium aan met 10% FBS
Dissociatiereagens
Accutase
Heruitplanten
Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten.
Zaaidichtheid
1 x 104 cellen/cm2
Vloeistofverversing
2 tot 3 keer per week
Herstel na ontdooiing
Na ontdooien, de cellen op een plaat aanbrengen met een dichtheid van 5 x 104 cellen/cm2 en de cellen minstens 24 uur laten herstellen van het invriesproces en zich hechten.
Ontdooien en kweken
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kwaliteitscontrole en cryopreservatie

Onvruchtbaarheid

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Kweekmedium invriezen
Als cryoconserveringsmedium gebruiken we volledig groeimedium (inclusief FBS) + 10% DMSO voor voldoende levensvatbaarheid na het ontdooien, of CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100), dat geoptimaliseerde osmoprotectanten en metabolische stabilisatoren bevat om het herstel te verbeteren en door cryo geïnduceerde stress te verminderen.
Opslagvoorwaarden

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Verzendvoorwaarden

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

08Donateur

Leeftijd van de donor
27 jaar
Etnische afkomst
Kaukasisch