Премини към съдържанието
Клетки HEL-299
Тъкан
Бял дроб
Синоними
HEL 299, Hel-299, Hel 299, HEL299

Документи

Клетки HEL-299

Cell line · Номер на продукта 300193

HEL-299 е клетъчна линия от човешки белодробни фибробласти, получена от възрастен индивид. Тази клетъчна линия се отличава особено със своята ограничена способност за размножаване...

€430.00без ДДС и доставка
Изработва се по поръчка
1

01Обща информация

Описание

HEL-299 е човешка клетъчна линия от белодробни фибробласти, получена от възрастен човек. Тази клетъчна линия се отличава с ограничена способност за размножаване в култура, като обикновено навлиза в стареене след приблизително десет пасажа. Тази характеристика прави HEL-299 полезен модел за изучаване на клетъчното стареене и стареене, както и на динамиката на клетъчния растеж и репликация при контролирани условия.

В допълнение към приложенията си в изследванията на стареенето, HEL-299 служи и като модел за изучаване на пътищата на сигнална трансдукция. По-конкретно е наблюдавано, че експресията на мускариновия рецептор М2 в тези клетки се понижава след стимулиране с протеин киназа С. Тази реакция подчертава полезността на клетъчната линия във фармакологичните изследвания и в изследването на механизмите, които са в основата на рецепторно медиираната сигнализация и регулация. Промяната в експресията на рецептора вследствие на киназната активност може да даде представа за клетъчните отговори на външни стимули, като потенциално подпомогне разработването на терапевтични стратегии, насочени към подобни пътища при различни заболявания.

Тъкан
Бял дроб
Синоними
  • HEL 299
  • Hel-299
  • Hel 299
  • HEL299

02Класификация

Организъм
Човек
Секс
Мъж
Свойства, свързани с растежа
Привърженик
Ниво на биологична безопасност
1

03Характеристики

Кариотип
Нормален човешки мъж, диплоиден, стабилен

04Идентификатори

Източник
HEL-299 (каталожен номер 300193 на Cytion)
Данъчен идентификационен номер в NCBI
9606
Целозавър
CVCL_2480

05Проява и предразположеност

Експресирани рецептори
М2 мускаринов рецептор
Експресия на протеини
P53 отрицателен
Изоензими
G6PD, A
Податливост към вируси
Везикуларен стоматит (Индиана), полиовирус 1
Обратна транскриптаза
Отрицателен

06Обработка и отглеждане

Хранителна среда
Ham's F12, w: 1,0 mM стабилен глутамин, w: 1,0 mM натриев пируват, w: 1,1 g/L NaHCO3 (номер на статията в Cytion 820600a)
Атмосфера за инкубация

37°C, 5%CO2, овлажнена атмосфера.

Добавки
Допълнете средата с 10% FBS, 1 ng/mL bFGF
Реагент за дисоциация
Accutase
Пресаждане
Отстранете старата среда от адхезивните клетки и ги промийте с PBS, която не съдържа калций и магнезий. За колби Т25 използвайте 3-5 ml PBS, а за колби Т75 - 5-10 ml. След това покрийте клетките изцяло с Accutase, като използвате 1-2 ml за колби Т25 и 2,5 ml за колби Т75. Оставете клетките да се инкубират на стайна температура за 8-10 минути, за да се отделят. След инкубацията внимателно разбъркайте клетките с 10 ml среда, за да ги ресуспендирате, след което центрофугирайте при 300xg за 3 минути. Изхвърлете супернатантата, ресуспендирайте клетките в прясна среда и ги прехвърлете в нови колби, които вече съдържат прясна среда.
Плътност на засяването
1 x 104 клетки/cm2
Възстановяване след размразяване
След размразяване, поставете клетките в плаки с плътност 5 x 104 клетки/cm2 и оставете клетките да се възстановят от процеса на замразяване и да се прикрепят за най-малко 24 часа.
Размразяване и култивиране
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Контрол на качеството и криоконсервация

Стерилност

Замърсяването с микоплазма се изключва както чрез PCR-базирани анализи, така и чрез луминесцентни методи за откриване на микоплазма.

За да се гарантира, че няма бактериално, гъбично или дрождево замърсяване, клетъчните култури се подлагат на ежедневни визуални проверки.

Среда за замразяване
Като среда за криоконсервация използваме пълна среда за растеж (включително FBS) + 10% DMSO за адекватна жизнеспособност след размразяване или CM-1 (каталожен номер 800100 на Cytion), която включва оптимизирани осмопротектори и метаболитни стабилизатори за подобряване на възстановяването и намаляване на криоиндуцирания стрес.
Условия за съхранение

За дълготрайно съхранение поставете флаконите в течен азот в парна фаза при температура около -150 до -196 °C. Съхранението при -80 °C е приемливо само като кратък междинен етап преди прехвърлянето в течен азот.

Условия за доставка

Криоконсервираните клетъчни линии се транспортират върху сух лед в утвърдени, изолирани опаковки с достатъчно хладилен агент, за да се поддържа приблизително -78 °C по време на транспортирането. При получаването незабавно прегледайте опаковката и незабавно прехвърлете флаконите за подходящо съхранение.

08Дарител

Възраст на донора
Плод
Етническа принадлежност
Африкански