Przejdź do treści
Komórki HEL-299
Chusteczka
Płuco
Synonimy
HEL 299, Hel-299, Hel 299, HEL299

Dokumenty

Komórki HEL-299

Cell line · Numer produktu 300193

HEL-299 to ludzka linia komórkowa fibroblastów płucnych pochodząca od osoby dorosłej. Linia ta wyróżnia się przede wszystkim ograniczoną zdolnością do namnażania się...

€430.00bez podatku i kosztów wysyłki
Wykonane na zamówienie
1

01Informacje ogólne

Opis

HEL-299 to ludzka linia komórkowa fibroblastów płuc pochodzących od dorosłego osobnika. Ta linia komórkowa jest szczególnie znana ze swojej ograniczonej zdolności do rozmnażania się w hodowli, zazwyczaj wchodząc w okres starzenia po około dziesięciu pasażach. Ta cecha sprawia, że HEL-299 jest użytecznym modelem do badania starzenia się i starzenia się komórek, a także dynamiki wzrostu i replikacji komórek w kontrolowanych warunkach.

Oprócz zastosowań w badaniach nad starzeniem, HEL-299 służy również jako model do badania szlaków transdukcji sygnału. W szczególności zaobserwowano, że ekspresja receptora muskarynowego M2 w tych komórkach jest obniżona po stymulacji kinazą białkową C. Ta odpowiedź podkreśla użyteczność linii komórkowej w badaniach farmakologicznych oraz w badaniu mechanizmów leżących u podstaw sygnalizacji i regulacji za pośrednictwem receptora. Zmiana ekspresji receptora po aktywności kinazy może zapewnić wgląd w odpowiedzi komórkowe na bodźce zewnętrzne, potencjalnie pomagając w opracowaniu strategii terapeutycznych ukierunkowanych na podobne szlaki w różnych chorobach.

Chusteczka
Płuco
Synonimy
  • HEL 299
  • Hel-299
  • Hel 299
  • HEL299

02Klasyfikacja

Organizm
Człowiek
Seks
Mężczyzna
Właściwości związane ze wzrostem
Zwolennik
Poziom bezpieczeństwa biologicznego
1

03Cechy charakterystyczne

Karyotyp
Normalny ludzki mężczyzna, diploidalny, stabilny

04Identyfikatory

Źródło
HEL-299 (numer katalogowy Cytion 300193)
Numer identyfikacji podatkowej NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_2480

05Ekspresja i podatność

Receptory ulegające ekspresji
Receptor muskarynowy M2
Ekspresja białek
P53 ujemny
Izoenzymy
G6PD, A
Podatność na wirusy
Pęcherzykowe zapalenie jamy ustnej (Indiana), wirus polio 1
Transkryptaza odwrotna
Negatywny

06Postępowanie i hodowla

Pożywka hodowlana
Ham's F12, w: 1,0 mM stabilnej glutaminy, w: 1,0 mM pirogronianu sodu, w: 1,1 g/L NaHCO3 (numer artykułu Cytion 820600a)
Atmosfera inkubacyjna

37°C, 5%CO2, nawilżona atmosfera.

Suplementy
Uzupełnić pożywkę 10% FBS, 1 ng/ml bFGF
Odczynnik dysocjacyjny
Accutase
Hodowla komórek w subkulturze
Usuń starą pożywkę z przylegających komórek i przemyj je PBS, który nie zawiera wapnia i magnezu. W przypadku kolb T25 należy użyć 3-5 ml PBS, a w przypadku kolb T75 5-10 ml. Następnie całkowicie pokryj komórki Accutase, używając 1-2 ml dla kolb T25 i 2,5 ml dla kolb T75. Pozwól komórkom inkubować w temperaturze pokojowej przez 8-10 minut, aby je oddzielić. Po inkubacji delikatnie wymieszaj komórki z 10 ml pożywki, aby ponownie je zawiesić, a następnie odwiruj przy 300xg przez 3 minuty. Odrzucić supernatant, ponownie zawiesić komórki w świeżej pożywce i przenieść je do nowych kolb zawierających już świeżą pożywkę.
Gęstość wysiewu
1 x 104 komórek/cm2
Powrót do stanu sprzed rozmrożenia
Po rozmrożeniu umieść komórki na płytce w ilości 5 x 104 komórek/cm2 i pozostaw je na co najmniej 24 godziny, aby mogły się zregenerować po procesie zamrażania i przylgnąć do podłoża.
Rozmrażanie i hodowla
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola jakości i kriokonserwacja

Bezpłodność

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

Pożywka do zamrażania
Jako pożywki do kriokonserwacji używamy kompletnej pożywki wzrostowej (w tym FBS) + 10% DMSO w celu zapewnienia odpowiedniej żywotności po rozmrożeniu lub CM-1 (numer katalogowy Cytion 800100), która zawiera zoptymalizowane osmoprotektanty i stabilizatory metaboliczne w celu zwiększenia regeneracji i zmniejszenia stresu wywołanego kriokonserwacją.
Warunki przechowywania

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Warunki wysyłki

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

08Darczyńca

Wiek dawcy
Płód
Pochodzenie etniczne
Afrykański