Ga naar de inhoud
HEL-299 Cellen
Weefsel
Long
Synoniemen
HEL 299, Hel-299, Hel 299, HEL299

Documenten

HEL-299 Cellen

Cell line · Productnummer 300193

HEL-299 is een menselijke longfibroblastcellijn die afkomstig is van een volwassen persoon. Deze cellijn staat met name bekend om zijn beperkte vermogen om zich te vermenigvuldigen in...

€430.00excl. btw en verzendkosten
Op bestelling gemaakt
1

01Algemene informatie

Beschrijving

HEL-299 is een menselijke longfibroblastcellijn afkomstig van een volwassen individu. Deze cellijn is vooral bekend om zijn eindige capaciteit om zich voort te planten in kweek, waarbij senescentie optreedt na ongeveer tien passages. Dit kenmerk maakt HEL-299 een nuttig model voor het bestuderen van cellulaire veroudering en senescentie, evenals de dynamiek van celgroei en replicatie onder gecontroleerde omstandigheden.

Naast de toepassingen in verouderingsonderzoek, dient HEL-299 ook als model voor het bestuderen van signaaltransductiepaden. Er is met name waargenomen dat de expressie van de M2 muscarine receptor in deze cellen wordt gedownreguleerd na stimulatie met proteïne kinase C. Deze respons benadrukt het nut van de cellijn voor farmacologisch onderzoek en voor het onderzoeken van mechanismen die ten grondslag liggen aan receptorgemedieerde signalering en regulatie. De verandering in receptorexpressie na kinaseactiviteit kan inzicht geven in cellulaire reacties op externe prikkels, wat mogelijk kan helpen bij de ontwikkeling van therapeutische strategieën die zich richten op vergelijkbare pathways bij verschillende ziekten.

Weefsel
Long
Synoniemen
  • HEL 299
  • Hel-299
  • Hel 299
  • HEL299

02Classificatie

Organisme
Mens
Seks
Man
Groei-eigenschappen
Aanhanger
Bioveiligheidsniveau
1

03Kenmerken

Karyotype
Normaal mannelijk, diploïd, stabiel

04Identificatiegegevens

Bronvermelding
HEL-299 (Cytion catalogusnummer 300193)
NCBI-belastingnummer
9606
Cellosaurus
CVCL_2480

05Expressie en vatbaarheid

Tot expressie gebrachte receptoren
M2 muscarine receptor
Eiwit-expressie
P53 negatief
Iso-enzymen
G6PD, A
Gevoeligheid voor virussen
Vesiculaire stomatitis (Indiana), poliovirus 1
Reverse transcriptase
Negatief

06Behandeling en kweek

Kweekmedium
Ham's F12, w: 1,0 mM stabiele Glutamine, w: 1,0 mM natriumpyruvaat, w: 1,1 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820600a)
Incubatieomgeving

37°C, 5%CO2, bevochtigde atmosfeer.

Supplementen
Vul het medium aan met 10% FBS, 1 ng/mL bFGF
Dissociatiereagens
Accutase
Heruitplanten
Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten.
Zaaidichtheid
1 x 104 cellen/cm2
Herstel na ontdooiing
Na ontdooien, de cellen op een plaat aanbrengen met een dichtheid van 5 x 104 cellen/cm2 en de cellen minstens 24 uur laten herstellen van het invriesproces en zich hechten.
Ontdooien en kweken
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kwaliteitscontrole en cryopreservatie

Onvruchtbaarheid

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Kweekmedium invriezen
Als cryoconserveringsmedium gebruiken we volledig groeimedium (inclusief FBS) + 10% DMSO voor voldoende levensvatbaarheid na het ontdooien, of CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100), dat geoptimaliseerde osmoprotectanten en metabolische stabilisatoren bevat om het herstel te verbeteren en door cryo geïnduceerde stress te verminderen.
Opslagvoorwaarden

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Verzendvoorwaarden

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

08Donateur

Leeftijd van de donor
Foetus
Etnische afkomst
Afrikaans