Mine otse sisu juurde
HEL-299 rakud
Kude
Kopsud
Sünonüümid
HEL 299, Hel-299, Hel 299, HEL299

Dokumendid

HEL-299 rakud

Cell line · Toote number 300193

HEL-299 on täiskasvanud inimeselt saadud inimese kopsufibroblastide rakuliin. See rakuliin on eriti tuntud oma piiratud paljunemisvõime poolest...

€430.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Tellimusel valmistatud
1

01Üldine teave

Kirjeldus

HEL-299 on inimese kopsufibroblastide rakuliin, mis on saadud täiskasvanud inimeselt. See rakuliin on eriti tuntud oma piiratud võime poolest paljuneda kultuuris, mis tavaliselt jõuab vananemisele umbes kümne läbimise järel. See omadus muudab HEL-299 kasulikuks mudeliks rakkude vananemise ja vananemise ning rakkude kasvu ja paljunemise dünaamika uurimiseks kontrollitud tingimustes.

Lisaks vananemisuuringutele on HEL-299 ka mudeliks signaaliülekande radade uurimiseks. Konkreetselt on täheldatud, et M2-muskariiniretseptori ekspressioon neis rakkudes väheneb pärast valgukinaas C-stimulatsiooni. See reaktsioon rõhutab rakuliini kasulikkust farmakoloogilistes uuringutes ja retseptori poolt vahendatud signaalimise ja reguleerimise aluseks olevate mehhanismide uurimisel. Retseptori ekspressiooni muutumine pärast kinaasi aktiivsust võib anda ülevaate rakkude vastustest välistele stiimulitele, mis võib aidata kaasa sarnastele radadele suunatud ravistrateegiate väljatöötamisele erinevate haiguste puhul.

Kude
Kopsud
Sünonüümid
  • HEL 299
  • Hel-299
  • Hel 299
  • HEL299

02Klassifikatsioon

Organism
Inimene
Sugu
Mees
Kasvuvõime
Järgija
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Karyotüüp
Normaalne inimese mees, diploidne, stabiilne

04Tunnused

Viide
HEL-299 (Cytioni katalooginumber 300193)
NCBI maksukood
9606
Cellosaurus
CVCL_2480

05Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Ekspresseeritud retseptorid
M2 muskariiniretseptor
Valgu ekspressioon
P53 negatiivne
Isoensüümid
G6PD, A
Viirusele vastuvõtlikkus
Vesikulaarne stomatiit (Indiana), polioviirus 1
Pöördtranskriptaas
Negatiivne

06Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
Ham's F12, w: 1,0 mM stabiilne glutamiin, w: 1,0 mM naatriumpüruvaat, w: 1,1 g/L NaHCO3 (Cytioni artikli number 820600a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS-ga, 1 ng/ml bFGF-ga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Külvitihedus
1 x 104 rakku/cm2
Taastumine pärast sulamist
Pärast sulatamist asetage rakud plaadile tihedusega 5 x 104 rakku/cm2 ja laske rakkudel külmutamisprotsessist taastuda ja kinnituda vähemalt 24 tunni jooksul.
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

08Annetaja

Doonori vanus
Loote
Etniline kuuluvus
Aafrika