Přejít na obsah
Buňky HEL-299
Tkáň
Plíce
Synonyma
HEL 299, Hel-299, Hel 299, HEL299

Dokumenty

Buňky HEL-299

Cell line · Číslo výrobku 300193

HEL-299 je buněčná linie lidských plicních fibroblastů odvozená od dospělého jedince. Tato buněčná linie je známá zejména svou omezenou schopností množit se...

€430.00bez DPH a poštovného
Na zakázku
1

01Obecné informace

Popis

HEL-299 je lidská buněčná linie plicních fibroblastů odvozená od dospělého jedince. Tato buněčná linie se vyznačuje zejména omezenou schopností rozmnožování v kultuře, obvykle po přibližně deseti pasážích vstupuje do senescence. Díky této vlastnosti je HEL-299 užitečným modelem pro studium buněčného stárnutí a senescence, jakož i dynamiky růstu a replikace buněk za kontrolovaných podmínek.

Kromě využití ve výzkumu stárnutí slouží HEL-299 také jako model pro studium signálních transdukčních drah. Konkrétně bylo pozorováno, že exprese muskarinového receptoru M2 je v těchto buňkách snížena po stimulaci proteinkinázou C. Tato reakce zdůrazňuje užitečnost buněčné linie ve farmakologickém výzkumu a při zkoumání mechanismů, které jsou základem signalizace a regulace zprostředkované receptory. Změna exprese receptoru po kinázové aktivitě může poskytnout vhled do buněčných odpovědí na vnější podněty a potenciálně pomoci při vývoji terapeutických strategií zaměřených na podobné dráhy u různých onemocnění.

Tkáň
Plíce
Synonyma
  • HEL 299
  • Hel-299
  • Hel 299
  • HEL299

02Klasifikace

Organismus
Člověk
Sex
Muž
Růstové vlastnosti
Přívrženec
Úroveň biologické bezpečnosti
1

03Charakteristika

Karyotyp
Normální lidský samec, diploidní, stabilní

04Identifikátory

Citace
HEL-299 (katalogové číslo Cytion 300193)
Daňové identifikační číslo NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_2480

05Exprese a náchylnost

Exprimované receptory
M2 muskarinový receptor
Exprese proteinů
P53 negativní
Isoenzymy
G6PD, A
Náchylnost k virům
Vesikulární stomatitida (Indiana), poliovirus 1
Reverzní transkriptáza
Negativní

06Manipulace a chov

Pěstovací médium
Ham's F12, w: 1,0 mM stabilní glutamin, w: 1,0 mM pyruvát sodný, w: 1,1 g/l NaHCO3 (číslo výrobku Cytion 820600a)
Inkubační atmosféra

37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplňky stravy
Doplňte médium 10% FBS, 1 ng/ml bFGF
Disociační činidlo
Accutase
Subkultivace
Odstraňte staré médium z adherovaných buněk a promyjte je PBS bez vápníku a hořčíku. Pro baňky T25 použijte 3-5 ml PBS a pro baňky T75 5-10 ml. Poté buňky zcela zakryjte přípravkem Accutase, přičemž použijte 1-2 ml pro baňky T25 a 2,5 ml pro baňky T75. Nechte buňky inkubovat při pokojové teplotě po dobu 8-10 minut, aby se oddělily. Po inkubaci jemně promíchejte buňky s 10 ml média, aby byly znovu suspendovány, a poté je odstřeďte při 300xg po dobu 3 minut. Supernatant vyhoďte, buňky znovu rozpusťte v čerstvém médiu a přeneste je do nových baněk, které již obsahují čerstvé médium.
Hustota výsevu
1 x 104 buněk/cm2
Zotavení po rozmrazení
Po rozmrazení naneste buňky v množství 5 x 104 buněk/cm2 a nechte je alespoň 24 hodin zotavit se z procesu zmrazení a přilnout.
Rozmrazování a kultivace
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kvality a kryokonzervace

Sterilita

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Mrazicí médium
Jako kryokonzervační médium používáme kompletní růstové médium (včetně FBS) + 10 % DMSO pro zajištění dostatečné životaschopnosti po rozmrazení nebo CM-1 (katalogové číslo 800100 společnosti Cytion), které obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory pro zlepšení regenerace a snížení stresu způsobeného kryo.
Podmínky skladování

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Dopravní podmínky

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

08Dárce

Věk dárce
Plod
Etnická příslušnost
Africké