Preskoči na vsebino
Celice HEL-299
Tkivo
Pljuča
Sinonimi
HEL 299, Hel-299, Hel 299, HEL299

Dokumenti

Celice HEL-299

Cell line · Številka izdelka 300193

HEL-299 je celična linija človeških pljučnih fibroblastov, pridobljena iz odrasle osebe. Ta celična linija je znana predvsem po omejeni sposobnosti razmnoževanja v...

€430.00brez davka in stroškov poštnine
Po naročilu
1

01Splošne informacije

Opis

HEL-299 je celična linija človeških pljučnih fibroblastov, pridobljena iz odraslega človeka. Ta celična linija je še posebej znana po svoji omejeni zmožnosti razmnoževanja v kulturi, saj po približno desetih prehodih običajno postane senescentna. Zaradi te lastnosti je HEL-299 uporaben model za preučevanje celičnega staranja in senescence ter dinamike celične rasti in razmnoževanja v nadzorovanih pogojih.

Poleg uporabe v raziskavah staranja je HEL-299 tudi model za preučevanje poti prenosa signalov. Natančneje, ugotovljeno je bilo, da se izražanje muskarinskega receptorja M2 v teh celicah zniža po stimulaciji s protein kinazo C. Ta odziv poudarja uporabnost celične linije v farmakoloških raziskavah in pri raziskovanju mehanizmov, ki so podlaga za signalizacijo in regulacijo, posredovano z receptorji. Spremembe v izražanju receptorja po kinazni aktivnosti lahko omogočijo vpogled v celične odzive na zunanje dražljaje, kar lahko pomaga pri razvoju terapevtskih strategij, usmerjenih na podobne poti pri različnih boleznih.

Tkivo
Pljuča
Sinonimi
  • HEL 299
  • Hel-299
  • Hel 299
  • HEL299

02Razvrstitev

Organizem
Človek
Seks
Moški
Lastnosti rasti
Pripadnik
Stopnja biološke varnosti
1

03Značilnosti

Kariotip
Normalni človeški moški, diploidni, stabilen

04Identifikatorji

Navajanje vira
HEL-299 (kataloška številka Cytion 300193)
Davčna identifikacijska številka NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_2480

05Izražanje in dovzetnost

Izraženi receptorji
M2 muskarinski receptor
Ekspresija beljakovin
P53 negativen
Izoenzimi
G6PD, A
Občutljivost na virus
Vesikularni stomatitis (Indiana), poliovirus 1
Reversna transkriptaza
Negativni

06Ravnanje in gojenje

Gojišče
Ham's F12, w: 1,0 mM stabilnega glutamina, w: 1,0 mM natrijevega piruvata, w: 1,1 g/L NaHCO3 (številka izdelka Cytion 820600a)
Inkubacijska atmosfera

37 °C, 5 %CO2, vlažno ozračje.

Prehranska dopolnila
Gojišče dopolnite z 10 % FBS, 1 ng/ml bFGF
Reagenca za disociacijo
Accutase
Preusmeritev v drugo kulturo
Odstranite staro gojišče z adherentnih celic in jih sperite s PBS, ki ne vsebuje kalcija in magnezija. Za bučke T25 uporabite 3-5 ml PBS, za bučke T75 pa 5-10 ml. Nato celice popolnoma prekrijte z Accutase, pri čemer uporabite 1-2 ml za bučke T25 in 2,5 ml za bučke T75. Celice pustite inkubirati pri sobni temperaturi 8-10 minut, da se ločijo. Po inkubaciji celice nežno premešajte z 10 ml gojišča, da se ponovno suspendirajo, nato jih 3 minute centrifugirajte pri 300xg. Zavrzite supernatant, ponovno suspendirajte celice v svežem gojišču in jih prenesite v nove bučke, ki že vsebujejo sveže gojišče.
Gostota setve
1 x 104 celic/cm2
Obnova po odtaljevanju
Po odmrzovanju celice razporedite na ploščo v gostoti 5 x 104 celic/cm2 in jim pustite, da si opomorejo od zamrzovanja in se prilepijo na ploščo, vsaj 24 ur.
Odtaljevanje in gojenje
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kakovosti in krioprezervacija

Sterilnost

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Medij za zamrzovanje
Kot gojišče za kriokonzervacijo uporabljamo popolno rastno gojišče (vključno s FBS) + 10 % DMSO za ustrezno vitalnost po odmrznitvi ali CM-1 (kataloška številka 800100 podjetja Cytion), ki vključuje optimizirane osmoprotektante in presnovne stabilizatorje za izboljšanje okrevanja in zmanjšanje stresa, povzročenega s kriom.
Pogoji shranjevanja

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Pogoji dostave

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

08Donator

Starost darovalca
Plod
Etnična pripadnost
Afriški