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HEL-299-Zellen
Gewebe
Lunge
Synonyme
HEL 299, Hel-299, Hel 299, HEL299

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HEL-299-Zellen

Cell line · Artikelnummer 300193

HEL-299 ist eine menschliche Lungenfibroblasten-Zelllinie, die von einer erwachsenen Person stammt. Diese Zelllinie zeichnet sich insbesondere durch ihre begrenzte Vermehrungsfähigkeit aus...

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Auftragsfertigung
1

01Allgemeine Informationen

Beschreibung

HEL-299 ist eine menschliche Lungenfibroblasten-Zelllinie, die von einer erwachsenen Person stammt. Diese Zelllinie zeichnet sich vor allem durch ihre begrenzte Fähigkeit aus, sich in Kultur zu vermehren, und tritt in der Regel nach etwa zehn Passagen in die Seneszenz ein. Diese Eigenschaft macht HEL-299 zu einem nützlichen Modell für die Untersuchung von Zellalterung und Seneszenz sowie der Dynamik von Zellwachstum und -replikation unter kontrollierten Bedingungen.

Neben seiner Anwendung in der Alterungsforschung dient HEL-299 auch als Modell für die Untersuchung von Signaltransduktionswegen. Insbesondere wurde beobachtet, dass die Expression des M2-Muskarinrezeptors in diesen Zellen nach Stimulation mit Proteinkinase C herunterreguliert wird. Diese Reaktion unterstreicht den Nutzen der Zelllinie in der pharmakologischen Forschung und bei der Untersuchung der Mechanismen, die der rezeptorvermittelten Signalübertragung und -regulierung zugrunde liegen. Die Veränderung der Rezeptorexpression nach einer Kinaseaktivität kann Einblicke in die zellulären Reaktionen auf äußere Reize geben und möglicherweise zur Entwicklung von therapeutischen Strategien beitragen, die auf ähnliche Signalwege bei verschiedenen Krankheiten abzielen.

Gewebe
Lunge
Synonyme
  • HEL 299
  • Hel-299
  • Hel 299
  • HEL299

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Männlich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Karyotyp
Normaler Mensch, männlich, diploid, stabil

04Bezeichner

Quellenangabe
HEL-299 (Cytion Katalognummer 300193)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_2480

05Expression und Anfälligkeit

Exprimierte Rezeptoren
M2-Muscarin-Rezeptor
Proteinexpression
P53 negativ
Isoenzyme
G6PD, A
Anfälligkeit für Viren
Vesikuläre Stomatitis (Indiana), Poliovirus 1
Reverse Transkriptase
Negativ

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
Ham's F12, w: 1,0 mM stabiles Glutamin, w: 1,0 mM Natriumpyruvat, w: 1,1 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820600a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10 % FBS, 1 ng/ml bFGF
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Aussaatdichte
1 x 104 Zellen/cm²
Erholung nach dem Auftauen
Nach dem Auftauen die Zellen mit einer Dichte von 5 x 104 Zellen/cm² ausplattieren und die Zellen mindestens 24 Stunden lang vom Gefrierprozess erholen und adhärieren lassen.
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Alter des Spenders
Fötus
Ethnische Zugehörigkeit
Afrika