Премини към съдържанието
LM/TK(LMTK-)
Тъкан
Подкожна съединителна тъкан, ареола на млечната жлеза и мазнини
Синоними
L-M[TK-], LM TK negative, L-M (TK-), L M (TK-), LM(TK-), LM(tk-), LM-TK-, LMTK-, L cells (TK-), L(TK-), L(tk-)

Документи

LM/TK(LMTK-)

Cell line · Номер на продукта 305176

The LM/TK- (LMTK-) cell line is derived from murine fibroblasts and is characterized by the lack of thymidine kinase (TK) activity. This cell line is part...

€430.00без ДДС и доставка
На склад
Лот
Препоръчани (най-новата партида)
  • CoA
1

01Обща информация

Описание

Клетъчната линия LM/TK- (LMTK-) е получена от миши фибробласти и се характеризира с липса на тимидин киназна (TK) активност. Тази клетъчна линия е особено полезна в генетичните и молекулярно-биологичните изследвания, където служи като моделна система за изучаване на генната функция, репликацията на ДНК и рекомбинацията. Липсата на ТК в тези клетки дава възможност за подбор на мутанти или рекомбинантни клетки, които са възстановили ТК активността си, което ги прави ценни при изследвания, включващи мутанти с дефицит на ТК, и за подбор на ТК-позитивни клонове след трансфекция с екзогенна ДНК. Тази клетъчна линия, получена от подлиния на клетъчната линия миши фибробласти L-M, която е устойчива на BUdR, може да се използва за генетични и биохимични изследвания, като например трансфер на гени и хибридизация на соматични клетки. LM/TK-клетките обикновено се използват в изследвания, свързани с гена на тимидинкиназата на вируса на херпес симплекс (HSV), тъй като те осигуряват важен фон за селекция на трансформанти на HSV-TK гена. Това има значително значение за изследванията в областта на генната терапия, където HSV-TK се използва в стратегии за самоубийствена генна терапия за селективно унищожаване на ракови клетки. Освен това тези клетки се използват при производството на рекомбинантни вируси и при анализа на експресията и репликацията на вирусните гени. По този начин клетъчната линия LMTK- играе решаваща роля за напредъка на нашето разбиране за генетичните манипулации и разработването на терапевтични стратегии.

Тъкан
Подкожна съединителна тъкан, ареола на млечната жлеза и мазнини
Синоними
  • L-M[TK-]
  • LM TK negative
  • L-M (TK-)
  • L M (TK-)
  • LM(TK-)
  • LM(tk-)
  • LM-TK-
  • LMTK-
  • L cells (TK-)
  • L(TK-)
  • L(tk-)

02Класификация

Организъм
Мишка
Секс
Мъж
Свойства, свързани с растежа
Привърженик
Ниво на биологична безопасност
1

03Характеристики

Морфология
Подобни на фибробласти
Туморогенен
Да, при голи мишки (тумори се развиват в рамките на 21 дни със 100 % честота (5/5) при голи мишки, инокулирани подкожно с 1×107 клетки).

04Идентификатори

Източник
LM/TK(LMTK-) (каталожен номер 305176 на Cytion)
Данъчен идентификационен номер в NCBI
10090
Целозавър
CVCL_4536

05Проява и предразположеност

Експресия на антигена
H-2k

06Обработка и отглеждане

Хранителна среда
DMEM, w: 4,5 g/L глюкоза, w: 4 mM L-глутамин, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM натриев пируват (номер на изделието на Cytion 820300a)
Атмосфера за инкубация

37°C, 5%CO2, овлажнена атмосфера.

Добавки
Допълнете средата с 10% FBS
Реагент за дисоциация
Accutase
Пресаждане
Отстранете старата среда от адхезивните клетки и ги промийте с PBS, която не съдържа калций и магнезий. За колби Т25 използвайте 3-5 ml PBS, а за колби Т75 - 5-10 ml. След това покрийте клетките изцяло с Accutase, като използвате 1-2 ml за колби Т25 и 2,5 ml за колби Т75. Оставете клетките да се инкубират на стайна температура за 8-10 минути, за да се отделят. След инкубацията внимателно разбъркайте клетките с 10 ml среда, за да ги ресуспендирате, след което центрофугирайте при 300xg за 3 минути. Изхвърлете супернатантата, ресуспендирайте клетките в прясна среда и ги прехвърлете в нови колби, които вече съдържат прясна среда.
Обновяване на течността
2 пъти седмично
Размразяване и култивиране
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Контрол на качеството и криоконсервация

Стерилност

Замърсяването с микоплазма се изключва както чрез PCR-базирани анализи, така и чрез луминесцентни методи за откриване на микоплазма.

За да се гарантира, че няма бактериално, гъбично или дрождево замърсяване, клетъчните култури се подлагат на ежедневни визуални проверки.

Среда за замразяване
Като среда за криоконсервация използваме пълна среда за растеж (включително FBS) + 10% DMSO за адекватна жизнеспособност след размразяване или CM-1 (каталожен номер 800100 на Cytion), която включва оптимизирани осмопротектори и метаболитни стабилизатори за подобряване на възстановяването и намаляване на криоиндуцирания стрес.
Условия за съхранение

За дълготрайно съхранение поставете флаконите в течен азот в парна фаза при температура около -150 до -196 °C. Съхранението при -80 °C е приемливо само като кратък междинен етап преди прехвърлянето в течен азот.

Условия за доставка

Криоконсервираните клетъчни линии се транспортират върху сух лед в утвърдени, изолирани опаковки с достатъчно хладилен агент, за да се поддържа приблизително -78 °C по време на транспортирането. При получаването незабавно прегледайте опаковката и незабавно прехвърлете флаконите за подходящо съхранение.

08Дарител

Порода / подвид
C3H/An
Възраст на донора
100 дни