Preskoči na vsebino
LM/TK(LMTK-)
Tkivo
Podkožno vezivno tkivo, areola dojke in maščoba
Sinonimi
L-M[TK-], LM TK negative, L-M (TK-), L M (TK-), LM(TK-), LM(tk-), LM-TK-, LMTK-, L cells (TK-), L(TK-), L(tk-)

Dokumenti

LM/TK(LMTK-)

Cell line · Številka izdelka 305176

The LM/TK- (LMTK-) cell line is derived from murine fibroblasts and is characterized by the lack of thymidine kinase (TK) activity. This cell line is part...

€430.00brez davka in stroškov poštnine
Na zalogi
Lot
Priporočeno (najsvežja pošiljka)
  • CoA
1

01Splošne informacije

Opis

Celična linija LM/TK- (LMTK-) izhaja iz mišjih fibroblastov, zanjo pa je značilno, da nima aktivnosti timidin kinaze (TK). Ta celična linija je še posebej uporabna v genetskih in molekularnobioloških raziskavah, kjer služi kot modelni sistem za preučevanje delovanja genov, replikacije DNK in rekombinacije. Odsotnost TK v teh celicah omogoča izbiro mutantov ali rekombinantnih celic, ki so ponovno pridobile aktivnost TK, zaradi česar so dragocene v študijah, ki vključujejo mutante s pomanjkanjem TK, in za izbiro klonov s pozitivno TK po transfekciji z eksogeno DNK. Ta celična linija, pridobljena iz podlinije linije mišjih fibroblastov L-M, ki je odporna na BUdR, se lahko uporablja za genetske in biokemične študije, kot sta prenos genov in hibridizacija somatskih celic. Celice LM/TK- se pogosto uporabljajo v raziskavah, ki vključujejo gen za timidin kinazo virusa herpes simpleksa (HSV), saj zagotavljajo ključno ozadje za izbiro transformantov gena HSV-TK. To ima pomemben vpliv na raziskave genskega zdravljenja, kjer se HSV-TK uporablja v samomorilskih strategijah genskega zdravljenja za selektivno uničevanje rakavih celic. Poleg tega se te celice uporabljajo pri proizvodnji rekombinantnih virusov ter pri analizi izražanja in replikacije virusnih genov. Tako ima celična linija LMTK- odločilno vlogo pri napredku našega razumevanja genske manipulacije in razvoju terapevtskih strategij.

Tkivo
Podkožno vezivno tkivo, areola dojke in maščoba
Sinonimi
  • L-M[TK-]
  • LM TK negative
  • L-M (TK-)
  • L M (TK-)
  • LM(TK-)
  • LM(tk-)
  • LM-TK-
  • LMTK-
  • L cells (TK-)
  • L(TK-)
  • L(tk-)

02Razvrstitev

Organizem
Miška
Seks
Moški
Lastnosti rasti
Pripadnik
Stopnja biološke varnosti
1

03Značilnosti

Morfologija
Fibroblastom podobni
Tumorigeničen
Da, pri golih miših (tumorji so se razvili v 21 dneh s 100-odstotno pogostostjo (5/5) pri golih miših, ki so bile subkutano inokulirane z 1×107 celicami).

04Identifikatorji

Navajanje vira
LM/TK(LMTK-) (kataloška številka Cytion 305176)
Davčna identifikacijska številka NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_4536

05Izražanje in dovzetnost

Ekspresija antigena
H-2k

06Ravnanje in gojenje

Gojišče
DMEM, w: 4,5 g/L glukoze, w: 4 mM L-glutamina, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM natrijevega piruvata (številka izdelka Cytion 820300a)
Inkubacijska atmosfera

37 °C, 5 %CO2, vlažno ozračje.

Prehranska dopolnila
Gojišče dopolnite z 10 % FBS
Reagenca za disociacijo
Accutase
Preusmeritev v drugo kulturo
Odstranite staro gojišče z adherentnih celic in jih sperite s PBS, ki ne vsebuje kalcija in magnezija. Za bučke T25 uporabite 3-5 ml PBS, za bučke T75 pa 5-10 ml. Nato celice popolnoma prekrijte z Accutase, pri čemer uporabite 1-2 ml za bučke T25 in 2,5 ml za bučke T75. Celice pustite inkubirati pri sobni temperaturi 8-10 minut, da se ločijo. Po inkubaciji celice nežno premešajte z 10 ml gojišča, da se ponovno suspendirajo, nato jih 3 minute centrifugirajte pri 300xg. Zavrzite supernatant, ponovno suspendirajte celice v svežem gojišču in jih prenesite v nove bučke, ki že vsebujejo sveže gojišče.
Obnova tekočine
2-krat na teden
Odtaljevanje in gojenje
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kakovosti in krioprezervacija

Sterilnost

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Medij za zamrzovanje
Kot gojišče za kriokonzervacijo uporabljamo popolno rastno gojišče (vključno s FBS) + 10 % DMSO za ustrezno vitalnost po odmrznitvi ali CM-1 (kataloška številka 800100 podjetja Cytion), ki vključuje optimizirane osmoprotektante in presnovne stabilizatorje za izboljšanje okrevanja in zmanjšanje stresa, povzročenega s kriom.
Pogoji shranjevanja

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Pogoji dostave

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

08Donator

Pasma / podvrsta
C3H/An
Starost darovalca
100 dni