LM/TK(LMTK-)

A linhagem celular LM/TK- (LMTK-) é derivada de fibroblastos murinos e caracteriza-se pela ausência de atividade da timidina quinase (TK). Essa linhagem celular é particularmente útil em pesquisas de biologia genética e molecular, nas quais serve como um sistema-modelo para o estudo da função gênica, da replicação do DNA e da recombinação. A ausência de TK nessas células permite a seleção de mutantes ou células recombinantes que recuperaram a atividade da TK, tornando-as valiosas em estudos envolvendo mutantes com deficiência de TK e para a seleção de clones TK-positivos após a transfecção com DNA exógeno. Essa linhagem celular, derivada de uma sublinhagem da linhagem de fibroblastos de camundongo L-M, que é resistente ao BUdR, é potencialmente utilizada para estudos genéticos e bioquímicos, tais como transferência gênica e hibridização de células somáticas. As células LM/TK- são comumente empregadas em pesquisas envolvendo o gene da timidina quinase do vírus do herpes simplex (HSV), pois fornecem uma base crucial para a seleção de transformantes do gene HSV-TK. Isso tem implicações significativas na pesquisa em terapia gênica, onde o HSV-TK é utilizado em estratégias de terapia gênica suicida para matar seletivamente células cancerosas. Além disso, essas células são utilizadas na produção de vírus recombinantes e na análise da expressão e replicação de genes virais. A linhagem celular LMTK-, portanto, desempenha um papel fundamental no avanço de nossa compreensão da manipulação genética e no desenvolvimento de estratégias terapêuticas.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.