HK-CRISPR-mEGFP-Nup358

HK-CRISPR-mEGFP-Nup358 rakuliin on geneetiliselt muundatud tuletis HeLa Kyoto rakkudest, mis on tuntud oma vastupidavuse ja laialdase kasutuse poolest teadusuuringutes. Seda rakuliini on muudetud CRISPR-Cas9-tehnoloogia abil, et ekspresseerida mEGFP (monomeeriline tõhustatud roheline fluorestseeruv valk) märgistatud Nup358, mis on tuumapoorikompleksi (NPC) oluline komponent. Nup358, tuntud ka kui RanBP2, mängib olulist rolli nukleotsütoplasma transpordis, mitootilise spindli kokkupanekus ja muudes rakulistes protsessides. MEGFP-märgis võimaldab Nup358 visualiseerida, hõlbustades selle rakusisese dünaamika ja interaktsioonide jälgimist reaalajas.

HeLa Kyoto rakke, mis on esialgse HeLa rakkude alamliin, iseloomustab nende kohanemisvõime ja stabiilne kasv kultuuris. CRISPR-Cas9-süsteem võimaldab selles rakuliinis täpset genoomi redigeerimist, tagades, et mEGFP-märgis on täpselt fusioonitud Nup358 valgu külge, ilma et see häiriks selle funktsiooni. See muudab rakuliini HK-CRISPR-mEGFP-Nup358 väärtuslikuks vahendiks tuumapoorikompleksi struktuuriliste ja funktsionaalsete aspektide uurimiseks. Teadlased saavad seda rakuliini kasutada, et saada teadmisi tuuma-sütoplasma transporti reguleerivatest mehhanismidest ja Nup358 rollist raku homöostaasis ja haigusseisundites, nagu vähk ja viirusinfektsioonid.

37°C, 5%_CO2, niisutatud atmosfäär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

Cytion seisab oma toodete kvaliteedi ja elujõulisuse eest. Me garanteerime, et meie rakud on elujõulised kasvatamise alguses 60 päeva jooksul pärast meie rajatistest saatmist. Tagame, et kõik materjalid vastavad analüüsisertifikaadis ja/või tootelehel kirjeldatud spetsifikatsioonidele

Täielikke üksikasju leiate meie <a href="""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Tagatise avaldusest