HK-CRISPR-mEGFP-Nup358

La linea cellulare HK-CRISPR-mEGFP-Nup358 è un derivato geneticamente modificato delle cellule HeLa di Kyoto, note per la loro robustezza e l'uso diffuso nella ricerca scientifica. Questa linea cellulare è stata modificata con la tecnologia CRISPR-Cas9 per esprimere mEGFP (monomeric Enhanced Green Fluorescent Protein) marcato Nup358, un componente cruciale del complesso del poro nucleare (NPC). Nup358, noto anche come RanBP2, svolge un ruolo significativo nel trasporto nucleocitoplasmatico, nell'assemblaggio del fuso mitotico e in altri processi cellulari. Il tag mEGFP consente la visualizzazione di Nup358, facilitando l'osservazione in tempo reale delle sue dinamiche e interazioni all'interno della cellula.

Le cellule HeLa Kyoto, una sotto-linea delle cellule HeLa originali, sono caratterizzate da adattabilità e crescita stabile in coltura. Il sistema CRISPR-Cas9 di questa linea cellulare consente un editing genomico preciso, garantendo che il tag mEGFP sia fuso con precisione alla proteina Nup358 senza interromperne la funzione. Ciò rende la linea cellulare HK-CRISPR-mEGFP-Nup358 uno strumento prezioso per studiare gli aspetti strutturali e funzionali del complesso del poro nucleare. I ricercatori possono utilizzare questa linea cellulare per approfondire i meccanismi che regolano il trasporto nucleocitoplasmatico e il ruolo di Nup358 nell'omeostasi cellulare e negli stati patologici, come il cancro e le infezioni virali.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia