HK-CRISPR-mEGFP-Nup358

A linha celular HK-CRISPR-mEGFP-Nup358 é um derivado geneticamente modificado das células HeLa de Quioto, conhecidas pela sua robustez e utilização generalizada na investigação científica. Esta linha celular foi modificada utilizando a tecnologia CRISPR-Cas9 para expressar a Nup358 marcada com mEGFP (monomeric Enhanced Green Fluorescent Protein), um componente crucial do complexo do poro nuclear (NPC). A Nup358, também conhecida como RanBP2, desempenha um papel significativo no transporte nucleocitoplasmático, na montagem do fuso mitótico e noutros processos celulares. A etiqueta mEGFP permite a visualização da Nup358, facilitando a observação em tempo real da sua dinâmica e interações no interior da célula.

As células HeLa Kyoto, uma sub-linha das células HeLa originais, são caracterizadas pela sua adaptabilidade e crescimento estável em cultura. O sistema CRISPR-Cas9 desta linha celular permite uma edição genómica precisa, assegurando que a etiqueta mEGFP é fundida com precisão à proteína Nup358 sem perturbar a sua função. Este facto torna a linha celular HK-CRISPR-mEGFP-Nup358 uma ferramenta valiosa para o estudo dos aspectos estruturais e funcionais do complexo do poro nuclear. Os investigadores podem utilizar esta linha celular para obter informações sobre os mecanismos que regem o transporte nucleocitoplasmático e o papel da Nup358 na homeostase celular e em estados patológicos, como o cancro e as infecções virais.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia