Mine otse sisu juurde
HROG17 T1 M1
Kude
Aju
Haigus
Glioblastoom

Dokumendid

HROG17 T1 M1

Cell line · Toote number 300875

HROG17 T1 M1 on primaarne inimese glioblastoma multiforme’i (GBM) rakuliin, mis on loodud WH-diagnoosiga täiskasvanud patsiendilt eemaldatud kasvajaproovist...

€800.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Laos
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
  • CoA
1

01Üldine teave

Kirjeldus

HROG17 T1 M1 on primaarne inimese glioblastoma multiforme (GBM) rakuliin, mis on loodud WHO IV astme glioblastoma diagnoosiga täiskasvanud patsiendilt eemaldatud kasvajaproovist. Tähis „T1” näitab, et proov võeti esimese operatsiooni ajal, „M1” tähistab aga sellest kasvajast saadud vastavat in vitro mudelit. Rakuliin loodi HROG (Hansestadt Rostock Glioma) platvormis, mis keskendub patsiendispetsiifilisi molekulaarseid ja fenotüübilisi omadusi säilitavate ultra-madala passaažiga glioomikultuuride loomisele.

HROG17 T1 M1 kasvab standardse kultiveerimise tingimustes adhesiivselt ja näitab primaarse GBM kultuurile tüüpilist fibroblastilaadset morfoloogiat. HROG-st saadud liinide immunofenotüübiline iseloomustus näitab gliaalsete ja närvirakkude liiniga seotud markerite, nagu gliaalsete fibrillaarse happelise valgu (GFAP), nestini ja vimentiini ekspressiooni, mis on kooskõlas kõrge astme astrotsütaarse kasvaja päritoluga. HROG-kogu molekulaarne profiilimine hõlmab kliiniliselt oluliste parameetrite hindamist, nagu MGMT-promootori metülatsioon, EGFR-amplifikatsiooni staatus ja võtmegeenide, sealhulgas TP53, IDH1/2, KRAS ja BRAF mutatsioonianalüüs, mis toetab kasvajaspetsiifiliste genoomimuutuste säilitamist kultuuris.

HROG17 T1 M1 on kasutatud glioblastoomi standardravi ravimite, sealhulgas alküülivate kemoteraapiate ja täiendavate sihtravimite tundlikkuse hindamiseks. HROG-mudelite võrdlev analüüs näitab, et madala passaažiga kultuurid säilitavad varajastes passaažides stabiilse morfoloogia, kasvukineetika ja ravimireaktsiooni profiilid. Patsiendilt saadud madala passaažiga glioblastoomi mudelina pakub HROG17 T1 M1 kliiniliselt olulist in vitro platvormi kõrge astme glioomi kasvajabioloogia, ravivastuse ja kasvajatevahelise heterogeensuse uurimiseks.

Kude
Aju
Haigus
Glioblastoom

02Klassifikatsioon

Organism
Inimene
Sugu
Mees
Kasvuvõime
Järgija
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Tunnused

Viide
HROG17 T1 M1 (Cytioni katalooginumber 300875)
NCBI maksukood
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FQ

04Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L glükoosi, w: 2,5 mM L-glutamiini, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM naatriumpüruvaati, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytioni artikli number 820400a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS-ga
Dissotsiatsioonireaktiiv
TrypLE Express, 37°C, 10 min,
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

05Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüokonserveerimissöötmena kasutame 50% põhikeskkonda + 40% FBS + 10% DMSO ehk CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüoostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

06Annetaja

Doonori vanus
70 aastat
Etniline kuuluvus
Kaukaasia