Pāriet uz saturu
HROG17 T1 M1
Audums
Smadzenes
Slimība
Glioblastoma

Dokumenti

HROG17 T1 M1

Cell line · Preces numurs 300875

HROG17 T1 M1 ir primārā cilvēka daudzveidīgās glioblastomas (GBM) šūnu līnija, kas izveidota no audzēja parauga, kas izgriezts pieaugušam pacientam, kuram diagnosticēta WH...

€800.00bez nodokļa un piegādes izmaksām
Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

HROG17 T1 M1 ir primārā cilvēka glioblastoma multiforme (GBM) šūnu līnija, kas izveidota no audzēja parauga, kas izgriezts pieaugušajam pacientam, kuram diagnosticēta IV pakāpes glioblastoma saskaņā ar PVO klasifikāciju. Apzīmējums „T1” norāda, ka paraugs tika iegūts pirmajā operācijas brīdī, bet „M1” apzīmē atbilstošo in vitro modeli, kas iegūts no šī audzēja. Šūnu līnija tika izveidota HROG (Hansestadt Rostock Glioma) platformā, kas koncentrējas uz ultra-zemas pasāžas gliomas kultūru izveidi, kas saglabā pacientam specifiskas molekulārās un fenotipiskās īpašības.

HROG17 T1 M1 aug piekļāvīgi standarta kultivēšanas apstākļos un uzrāda fibroblastiem līdzīgu morfoloģiju, kas ir tipiska primārajām GBM kultūrām. HROG atvasināto līniju imunofenotipiskā raksturošana parāda glioblastomu un neironu cilts līnijas marķieru, piemēram, glioblastomu fibrilārā skābā proteīna (GFAP), nestīna un vimentīna, ekspresiju, kas atbilst augstas pakāpes astrocitāra audzēja izcelsmei. Molekulārā profilēšana HROG kolekcijā ietver klīniski nozīmīgu parametru novērtēšanu, piemēram, MGMT promotora metilāciju, EGFR amplifikācijas statusu un galveno gēnu mutāciju analīzi, tostarp TP53, IDH1/2, KRAS un BRAF, kas atbalsta audzējam specifisku genomisko izmaiņu saglabāšanu kultūrā.

HROG17 T1 M1 ir izmantots, lai novērtētu jutību pret standarta ārstēšanas līdzekļiem glioblastomai, tostarp alkilējošiem ķīmijterapijas līdzekļiem un papildu mērķtiecīgiem savienojumiem. Salīdzinošās analīzes starp HROG modeļiem liecina, ka kultūras ar zemu pasāžu skaitu saglabā stabilu morfoloģiju, augšanas kinētiku un zāļu reakcijas profilus agrīnās pasāžas. Kā no pacientiem iegūts glioblastomas modelis ar zemu pasāžu skaitu, HROG17 T1 M1 nodrošina klīniski nozīmīgu in vitro platformu augstas pakāpes gliomas audzēja bioloģijas, terapeitiskās reakcijas un audzēju heterogenitātes pētīšanai.

Audums
Smadzenes
Slimība
Glioblastoma

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Sekss
Vīrietis
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Identifikatori

Atsauce
HROG17 T1 M1 (Cytion kataloga numurs 300875)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FQ

04Apstrāde un audzēšana

Barotne
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/l glikozes, w: 2,5 mM L-glutamīna, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM nātrija piruvāta, w: 1,2 g/l NaHCO3 (Cytion izstrādājuma numurs 820400a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS
Disociācijas reaģents
TrypLE Express, 37°C, 10 min,
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

05Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam 50 % bāzes barotni + 40 % FBS + 10 % DMSO vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu reģenerāciju un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

06Ziedotājs

Donora vecums
70 gadi
Etniskā piederība
Kaukāzietis