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HROG17 T1 M1
Tessuto
Cervello
Malattia
Glioblastoma

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HROG17 T1 M1

Cell line · Codice prodotto 300875

HROG17 T1 M1 è una linea cellulare primaria di glioblastoma multiforme (GBM) umano ottenuta da un campione tumorale asportato da un paziente adulto a cui era stata diagnosticata la sindrome di WH...

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01Informazioni generali

Descrizione

HROG17 T1 M1 è una linea cellulare primaria di glioblastoma multiforme (GBM) umano ottenuta da un campione tumorale asportato da un paziente adulto con diagnosi di glioblastoma di grado IV secondo la classificazione dell'OMS. La designazione "T1" indica che il campione è stato ottenuto al primo intervento chirurgico, mentre "M1" indica il corrispondente modello in vitro derivato da questo tumore. La linea cellulare è stata generata all'interno della piattaforma HROG (Hansestadt Rostock Glioma), che si concentra sulla creazione di colture di glioma a passaggi ultra-bassi che preservano le caratteristiche molecolari e fenotipiche specifiche del paziente.

HROG17 T1 M1 cresce in modo aderente in condizioni di coltura standard e presenta una morfologia simile a quella dei fibroblasti tipica delle colture primarie di GBM. La caratterizzazione immunofenotipica delle linee derivate da HROG dimostra l'espressione di marcatori associati alla linea gliale e neurale, come la proteina acida fibrillare gliale (GFAP), la nestina e la vimentina, in linea con l'origine del tumore astrocitico di alto grado. Il profilo molecolare all'interno della collezione HROG include la valutazione di parametri clinicamente rilevanti come la metilazione del promotore MGMT, lo stato di amplificazione dell'EGFR e l'analisi mutazionale di geni chiave tra cui TP53, IDH1/2, KRAS e BRAF, a sostegno della conservazione delle alterazioni genomiche specifiche del tumore in coltura.

HROG17 T1 M1 è stato utilizzato per valutare la sensibilità agli agenti standard di cura per il glioblastoma, compresi i chemioterapici alchilanti e ulteriori composti mirati. Analisi comparative tra i modelli HROG indicano che le colture a basso passaggio mantengono una morfologia stabile, cinetica di crescita e profili di risposta ai farmaci nei primi passaggi. In quanto modello di glioblastoma a basso passaggio derivato da pazienti, HROG17 T1 M1 fornisce una piattaforma in vitro clinicamente rilevante per lo studio della biologia tumorale, della risposta terapeutica e dell'eterogeneità intertumorale nel glioma di alto grado.

Tessuto
Cervello
Malattia
Glioblastoma

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Maschio
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Identificatori

Riferimento bibliografico
HROG17 T1 M1 (numero di catalogo Cytion 300875)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FQ

04Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L di glucosio, w: 2,5 mM di L-Glutammina, w: 15 mM di HEPES, w: 0,5 mM di Sodio piruvato, w: 1,2 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820400a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
TrypLE Express, 37°C, 10 min,
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

05Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo 50% di terreno basale + 40% di FBS + 10% di DMSO, o CM-1 (Cytion numero di catalogo 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crioindotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

06Donatore

Età dei donatori
70 anni
Etnia
Caucasico