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HROG17 T1 M1
Tecido
Cérebro
Doença
Glioblastoma

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HROG17 T1 M1

Cell line · Número do produto 300875

A HROG17 T1 M1 é uma linha celular primária de glioblastoma multiforme (GBM) humano, estabelecida a partir de uma amostra tumoral removida de um doente adulto diagnosticado com WH...

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01Informações gerais

Descrição

HROG17 T1 M1 é uma linha celular primária de glioblastoma multiforme (GBM) humano estabelecida a partir de uma amostra tumoral ressecada de um paciente adulto diagnosticado com glioblastoma grau IV da OMS. A designação «T1» indica que a amostra foi obtida no primeiro momento cirúrgico, enquanto «M1» denota o modelo in vitro correspondente derivado deste tumor. A linha celular foi gerada dentro da plataforma HROG (Hansestadt Rostock Glioma), que se concentra no estabelecimento de culturas de glioma de passagem ultrabaixa que preservam as características moleculares e fenotípicas específicas do paciente.

A HROG17 T1 M1 cresce de forma aderente em condições de cultura padrão e exibe uma morfologia semelhante à dos fibroblastos, típica das culturas primárias de GBM. A caracterização imunofenotípica das linhas derivadas da HROG demonstra a expressão de marcadores associados à linhagem glial e neural, tais como a proteína ácida fibrilar glial (GFAP), a nestina e a vimentina, consistentes com a origem tumoral astrocítica de alto grau. O perfil molecular dentro da coleção HROG inclui a avaliação de parâmetros clinicamente relevantes, como metilação do promotor MGMT, estado de amplificação do EGFR e análise mutacional de genes-chave, incluindo TP53, IDH1/2, KRAS e BRAF, apoiando a retenção de alterações genómicas específicas do tumor em cultura.

O HROG17 T1 M1 tem sido utilizado para avaliar a sensibilidade a agentes padrão de tratamento para glioblastoma, incluindo quimioterápicos alquilantes e compostos direcionados adicionais. Análises comparativas entre modelos HROG indicam que culturas de baixa passagem mantêm morfologia estável, cinética de crescimento e perfis de resposta a medicamentos nas primeiras passagens. Como um modelo de glioblastoma de baixa passagem derivado de pacientes, o HROG17 T1 M1 fornece uma plataforma in vitro clinicamente relevante para o estudo da biologia tumoral, resposta terapêutica e heterogeneidade intertumoral em gliomas de alto grau.

Tecido
Cérebro
Doença
Glioblastoma

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Masculino
Propriedades de crescimento
Aderente
Nível de biossegurança
1

03Identificadores

Referência
HROG17 T1 M1 (número de catálogo Cytion 300875)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FQ

04Manuseamento e cultura

Meio de cultura
DMEM:Ham's F12 (1:1), com: 3,1 g/L de glucose, com: 2,5 mM de L-Glutamina, com: 15 mM de HEPES, com: 0,5 mM de piruvato de sódio, com: 1,2 g/L de NaHCO3 (número de artigo Cytion 820400a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Reagente de dissociação
TrypLE Express, 37°C, 10 min,
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

05Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos 50% de meio basal + 40% de FBS + 10% de DMSO, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

06Doador

Idade do dador
70 anos
Etnia
Caucasiano