Siirry sisältöön
HROG17 T1 M1
Kudos
Aivot
Sairaus
Glioblastooma

Asiakirjat

HROG17 T1 M1

Cell line · Tuotenumero 300875

HROG17 T1 M1 on primaarinen ihmisen glioblastoma multiforme (GBM) -solulinja, joka on peräisin kasvaimenäytteestä, joka on poistettu aikuiselta potilaalta, jolla oli diagnosoitu WH...

€800.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
  • CoA
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus

HROG17 T1 M1 on primaarinen ihmisen glioblastoma multiforme (GBM) -solulinja, joka on perustettu aikuista potilasta, jolla on diagnosoitu WHO:n luokan IV glioblastoma, resektoidusta kasvainnäytteestä. Merkintä ”T1” tarkoittaa, että näyte on otettu ensimmäisen leikkauksen yhteydessä, kun taas ”M1” tarkoittaa vastaavaa in vitro -mallia, joka on johdettu tästä kasvaimesta. Solulinja on luotu HROG (Hansestadt Rostock Glioma) -alustalla, joka keskittyy erittäin matalan passageluvun glioomakulttuurien luomiseen, jotka säilyttävät potilaskohtaiset molekyyli- ja fenotyyppiset ominaisuudet.

HROG17 T1 M1 kasvaa tarttuvasti tavallisissa viljelyolosuhteissa ja osoittaa fibroblastien kaltaista morfologiaa, joka on tyypillistä primaarisille GBM-viljelmille. HROG-peräisten linjojen immunofenotyyppinen karakterisointi osoittaa glia- ja hermosolulinjaan liittyvien merkkiaineiden, kuten gliafibrillaarisen happaman proteiinin (GFAP), nestinin ja vimentiinin, ilmentymisen, mikä on yhdenmukaista korkea-asteisen astrosyyttisen kasvaimen alkuperän kanssa. HROG-kokoelman molekyyliprofilointi sisältää kliinisesti merkittävien parametrien, kuten MGMT-promoottorin metylaation, EGFR-amplifikaation tilan ja keskeisten geenien, kuten TP53, IDH1/2, KRAS ja BRAF, mutaatioanalyysin arvioinnin, mikä tukee kasvaimille tyypillisten genomimuutosten säilyttämistä viljelmässä.

HROG17 T1 M1:tä on käytetty glioblastooman standardihoitoaineiden, kuten alkyloivien kemoterapeuttisten aineiden ja muiden kohdennettujen yhdisteiden, herkkyyden arviointiin. HROG-mallien väliset vertailuanalyysit osoittavat, että matalan passageluvun viljelmät säilyttävät stabiilin morfologian, kasvukineettiset ominaisuudet ja lääkevasteprofiilit varhaisissa passageluvuissa. Potilaasta peräisin olevana, matalan passageluvun glioblastoomamallina HROG17 T1 M1 tarjoaa kliinisesti merkittävän in vitro -alustan korkea-asteisen gliooman tuumoribiologian, terapeuttisen vasteen ja tuumorien välisen heterogeenisyyden tutkimiseen.

Kudos
Aivot
Sairaus
Glioblastooma

02Luokittelu

Organismi
Ihminen
Sukupuoli
Mies
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
Bioturvallisuustaso
1

03Tunnisteet

Lähdeviite
HROG17 T1 M1 (Cytionin luettelonumero 300875)
NCBI-verotunnus
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FQ

04Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L glukoosia, w: 2,5 mM L-glutamiinia, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM natriumpyruvaattia, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytionin artikkelinumero 820400a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 10 %:lla FBS:llä
Dissosiaatioreagenssi
TrypLE Express, 37 °C, 10 min,
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

05Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme 50 % perusmediaa + 40 % FBS + 10 % DMSO:ta eli CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytysstressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

06Lahjoittaja

Luovuttajan ikä
70 vuotta
Etnisyys
Kaukasialainen