Prejsť na obsah
HROG17 T1 M1
Tkanivo
Mozog
Choroba
Glioblastóm

Dokumenty

HROG17 T1 M1

Cell line · Číslo výrobku 300875

HROG17 T1 M1 je primárna ľudská bunková línia glioblastómu multiforme (GBM), získaná z nádorovej vzorky odobratej dospelému pacientovi s diagnózou WH...

€800.00bez DPH a poštovného
Na sklade
Lot
Odporúčané (najčerstvejšia várka)
  • CoA
1

01Všeobecné informácie

Popis

HROG17 T1 M1 je primárna ľudská bunková línia glioblastoma multiforme (GBM) vytvorená z nádorovej vzorky odobratej dospelému pacientovi s diagnózou glioblastomu stupňa IV podľa WHO. Označenie „T1“ znamená, že vzorka bola odobratá pri prvom chirurgickom zákroku, zatiaľ čo „M1“ označuje zodpovedajúci in vitro model odvodený z tohto nádoru. Bunka bola vytvorená v rámci platformy HROG (Hansestadt Rostock Glioma), ktorá sa zameriava na vytvorenie kultúr gliómov s ultra nízkym počtom pasáží, ktoré zachovávajú molekulárne a fenotypové charakteristiky špecifické pre daného pacienta.

HROG17 T1 M1 rastie adhezívne za štandardných kultivačných podmienok a vykazuje morfológiu podobnú fibroblastom, typickú pre primárne kultúry GBM. Imunofenotypová charakteristika línií odvodených z HROG preukazuje expresiu markerov spojených s gliálnou a neurálnou líniou, ako je gliálny fibrilárny kyselý proteín (GFAP), nestín a vimentín, čo je v súlade s pôvodom astrocytového nádoru vysokého stupňa. Molekulárne profilovanie v rámci kolekcie HROG zahŕňa hodnotenie klinicky relevantných parametrov, ako je metylácia promotora MGMT, stav amplifikácie EGFR a mutačná analýza kľúčových génov, vrátane TP53, IDH1/2, KRAS a BRAF, čo podporuje zachovanie nádorovo špecifických genomických zmien v kultúre.

HROG17 T1 M1 sa používa na hodnotenie citlivosti na štandardné liečivá pre glioblastóm, vrátane alkylujúcich chemoterapeutík a ďalších cielených zlúčenín. Porovnávacie analýzy medzi modelmi HROG naznačujú, že kultúry s nízkym počtom pasáží si zachovávajú stabilnú morfológiu, kinetiku rastu a profily reakcie na lieky v porovnaní s ranými pasážami. Ako model glioblastómu s nízkym počtom pasáží odvodený od pacienta poskytuje HROG17 T1 M1 klinicky relevantnú in vitro platformu na štúdium biológie nádoru, terapeutickej reakcie a intertumorálnej heterogenity pri vysokostupňových gliómoch.

Tkanivo
Mozog
Choroba
Glioblastóm

02Klasifikácia

Organizmus
Človek
Sex
Muž
Rastové vlastnosti
Prívrženec
Úroveň biologickej bezpečnosti
1

03Identifikátory

Citácia
HROG17 T1 M1 (katalógové číslo Cytion 300875)
Daňové identifikačné číslo NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FQ

04Manipulácia a kultivácia

Kultivačné médium
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/l glukózy, w: 2,5 mM L-glutamínu, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM pyruvátu sodného, w: 1,2 g/l NaHCO3 (číslo výrobku Cytion 820400a)
Inkubačná atmosféra

37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplnky stravy
Doplňte médium o 10 % FBS
Disociačné činidlo
TrypLE Express, 37 °C, 10 min,
Rozmnožovanie kultúr
Odstráňte staré médium z adherovaných buniek a premyte ich PBS, ktorý neobsahuje vápnik a horčík. Pre banky T25 použite 3 - 5 ml PBS a pre banky T75 použite 5 - 10 ml. Potom bunky úplne pokryte Accutase, pričom použite 1 - 2 ml pre banky T25 a 2,5 ml pre banky T75. Nechajte bunky inkubovať pri izbovej teplote 8-10 minút, aby sa oddelili. Po inkubácii jemne premiešajte bunky s 10 ml média, aby boli znovu suspendované, a potom ich 3 minúty odstreďujte pri 300xg. Supernatant zlikvidujte, bunky znovu rozmiešajte v čerstvom médiu a preneste ich do nových fliaš, ktoré už obsahujú čerstvé médium.
Rozmrazovanie a kultivácia
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

05Kontrola kvality a kryokonzervácia

Sterilita

Kontaminácia mykoplazmami sa vylučuje pomocou testov založených na PCR a metód detekcie mykoplaziem založených na luminiscencii.

Aby sa zabezpečilo, že nedošlo ku kontaminácii baktériami, hubami alebo kvasinkami, bunkové kultúry sa denne vizuálne kontrolujú.

Mrazové médium
Ako kryokonzervačné médium používame 50 % bazálne médium + 40 % FBS + 10 % DMSO alebo CM-1 (katalógové číslo Cytion 800100), ktoré obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory na zlepšenie regenerácie a zníženie stresu spôsobeného kryo.
Podmienky skladovania

Na dlhodobé uchovávanie umiestnite injekčné liekovky do kvapalnej fázy dusíka v pare pri teplote približne -150 až -196 °C. Skladovanie pri teplote -80 °C je prijateľné len ako krátky prechodný krok pred presunom do tekutého dusíka.

Dopravné podmienky

Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu.

06Darca

Vek darcu
70 rokov
Etnická príslušnosť
Kaukazský