Mine otse sisu juurde
Kude
Maksa metastaasid
Haigus
Adenokartsinoom
Metastaaside asukoht
Maksa

Dokumendid

HROC348Met

Cell line · Toote number 300871

HROC348Met is a human colorectal carcinoma cell line established from a metachronous liver metastasis of a colorectal adenocarcinoma resected from an adul...

€800.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Tellimusel valmistatud
1

01Üldine teave

Kirjeldus

HROC348Met on inimese kolorektaalse kartsinoomi rakuliin, mis on loodud HROC (Hansestadt Rostock Colorectal Cancer) mudelikogus olevast täiskasvanud patsiendilt resekteeritud kolorektaalse adenokartsinoomi metakroonilisest maksametastaasist. HROC platvorm loodi standardiseeritud biopanga ja kasvajate modelleerimise protsessi kaudu, integreerides kliinilised märkused, molekulaarse iseloomustuse, patsientidelt saadud ksenotransplantaatid (PDX) ja vastavad in vitro kultuurid. HROC348Met esindab ühte metastaatilist mudelit, mis on saadud kirurgiliselt eemaldatud kolorektaalse vähirakust ja loodud madala passaaži tingimustes, et säilitada kasvajaspetsiifilised bioloogilised omadused.

HROC-kogus näitasid metastaatilised proovid – eriti maksa metastaasid – kõrget siirdamise efektiivsust immuunpuudulikkusega hiirtel, kus PDX-i üldine siirdamise määr oli kogu kohordis ligikaudu 68% ja metastaatiliste kasvajate puhul oli edukus isegi suurem kui primaarse kasvaja puhul. Mitmemõõtmelised analüüsid tuvastasid lümfisõlmede kaasatuse ja KRAS-i ja BRAF-i aktiveerivad mutatsioonid kui sõltumatud ennustavad tegurid mudeli edukaks loomiseks. Kogum hõlmab kõiki kolorektaalse kartsinoomi peamisi molekulaarseid alatüüpe, sealhulgas kromosoomide ebastabiilsust (CIN), CpG-saarte metülatsioonifenotüüpi (CIMP), mikrosatelliitide stabiilsust (MSS) ja mikrosatelliitide kõrget ebastabiilsust (MSI-H) kasvajaid, tagades molekulaarse representatiivsuse haiguse edasijõudnud staadiumis. HROC348Met loodi selle rangelt iseloomustatud raamistiku piires, kliinilis-patoloogiliste ja molekulaarsete märkustega vastavalt standardiseeritud protokollidele.

Metastaasidest pärineva, madala passaažiga kolorektaalse kartsinoomi mudelina sobib HROC348Met metastaatilise kasvaja bioloogia, genotüübi-fenotüübi korrelatsioonide ja ravivastuse testimise uurimiseks nii 2D-kultuuris kui ka in vivo PDX-keskkonnas. Selle loomise aluseks olev integreeritud biopanga lähenemine tagab sobivate kliiniliste andmete ja vajaduse korral vastava ksenotransplantaadi materjali kättesaadavuse, võimaldades teha translatsioonilisi uuringuid täppisonkoloogias ja ravimivastuse prognoosimisel.

Kude
Maksa metastaasid
Haigus
Adenokartsinoom
Metastaaside asukoht
Maksa

02Klassifikatsioon

Organism
Inimene
Sugu
Mees
Kasvuvõime
Järgija
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

MSI staatus
MSS

04Tunnused

Viide
HROC348Met (Cytioni katalooginumber 300871)
NCBI maksukood
9606
Cellosaurus
CVCL_1U99

05Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L glükoosi, w: 2,5 mM L-glutamiini, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM naatriumpüruvaati, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytioni artikli number 820400a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS-ga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Vedeliku vahetus
Iga 3 kuni 5 päeva tagant
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

07Annetaja

Doonori vanus
77 aastat
Etniline kuuluvus
Kaukaasia