Pāriet uz saturu
Audums
Aknu metastāzes
Slimība
Adenokarcinoma
Metastāžu vieta
Aknas

Dokumenti

HROC348Met

Cell line · Preces numurs 300871

HROC348Met is a human colorectal carcinoma cell line established from a metachronous liver metastasis of a colorectal adenocarcinoma resected from an adul...

€800.00bez nodokļa un piegādes izmaksām
Pēc pasūtījuma
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

HROC348Met ir cilvēka kolorektālā karcinoma šūnu līnija, kas izveidota no metahronas aknu metastāzes kolorektālās adenokarcinomas, kas izgriezta pieaugušam pacientam HROC (Hansestadt Rostock Colorectal Cancer) modeļu kolekcijā. HROC platforma tika izveidota, izmantojot standartizētu biobanku un audzēju modelēšanas procesu, kas integrē klīniskās anotācijas, molekulāro raksturojumu, no pacientiem iegūtos ksenotransplantātus (PDX) un atbilstošas in vitro kultūras. HROC348Met ir viens no metastātiskajiem modeļiem, kas iegūts no ķirurģiski izgriezta kolorektālā vēža audu, un tas tika izveidots zemas pasāžas apstākļos, lai saglabātu audzējam specifiskās bioloģiskās īpašības.

HROC kolekcijā metastātiskie paraugi — īpaši aknu metastāzes — demonstrēja augstu implantācijas efektivitāti imūndeficītiem pelēm, ar kopējo PDX uzņemšanas rādītāju aptuveni 68 % visā kohortā un pat vēl augstāku panākumu metastātiskajiem audzējiem salīdzinājumā ar primārajiem audzējiem. Daudzfaktoru analīzes identificēja limfmezglu iesaistīšanos un aktivējošas mutācijas KRAS un BRAF kā neatkarīgus veiksmīgas modeļa izveides prognozes rādītājus. Kolekcija ietver visus galvenos kolorektālā karcinoma molekulāros apakštipus, tostarp hromosomu nestabilitāti (CIN), CpG salu metilatoru fenotipu (CIMP), mikrosatelītu stabilitāti (MSS) un mikrosatelītu nestabilitāti (MSI-H), nodrošinot molekulāro reprezentativitāti slimības progresējošā stadijā. HROC348Met tika izveidots šajā stingri raksturotajā sistēmā, ar klīnikopatoloģiskām un molekulārām anotācijām saskaņā ar standartizētiem protokoliem.

Kā metastāzes izcelsmes, zema pasāža kolorektālā karcinoma modelis, HROC348Met ir piemērots metastātisko audzēju bioloģijas, genotipa-fenotipa korelāciju un terapeitiskās reakcijas testēšanai gan 2D kultūrā, gan in vivo PDX vidē. Integrētā biobankas pieeja, kas ir tā izveides pamatā, nodrošina atbilstošu klīnisku datu pieejamību un, ja nepieciešams, atbilstošu ksenotransplantātu materiālu, ļaujot veikt translacionālus pētījumus precīzās onkoloģijas un zāļu reakcijas prognozēšanas jomā.

Audums
Aknu metastāzes
Slimība
Adenokarcinoma
Metastāžu vieta
Aknas

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Sekss
Vīrietis
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

MSI statuss
MSS

04Identifikatori

Atsauce
HROC348Met (Cytion kataloga numurs 300871)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
CVCL_1U99

05Apstrāde un audzēšana

Barotne
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/l glikozes, w: 2,5 mM L-glutamīna, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM nātrija piruvāta, w: 1,2 g/l NaHCO3 (Cytion izstrādājuma numurs 820400a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Šķidruma atjaunošana
Ik pēc 3 līdz 5 dienām
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

07Ziedotājs

Donora vecums
77 gadi
Etniskā piederība
Kaukāzietis