Mine otse sisu juurde
MLE-12
Kude
Kopsud
Haigus
Tavaline
Sünonüümid
MLE 12, MLE12, Murine Lung Epithelial-12

Dokumendid

MLE-12

Cell line · Toote number 305314

€550.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Laos
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
  • CoA
  • CoA
1

01Üldine teave

Kirjeldus

MLE-12 on hiirte kopsuepiteeli rakuliin, mis on loodud distaalsest hingamisteede epiteelist, kasutades transgeenseid hiiri, kes ekspresseerivad simian virus 40 (SV40) suurt tuumoriantigeeni inimese surfaktandi C (SP-C) promootori kontrolli all. Seda rakuliini iseloomustab võime säilitada teatud alveolaarsete II tüüpi rakkude omadusi, nagu surfaktandi valkude SP-B ja SP-C ekspressioon, mis on olulised kopsu surfaktandi sünteesi ja kopsufunktsiooni jaoks. MLE-12 rakkudel on ka II tüüpi alveolaarsete rakkude peamised morfoloogilised omadused, sealhulgas mikrovillid ja multivesikulaarsed kehad, kuigi neil puuduvad mõned omadused, nagu lamellilised kehad hilisemates faasides.

MLE-12 rakuliini kasutatakse laialdaselt surfaktandi valkude regulatsiooni, sekretsiooni ja kopsu reaktsioonide uurimiseks stiimulitele. See eritab fosfolipiide vastuseks erinevatele sekretsiooni tekitavatele ainetele, nagu ATP ja forbolestrid, jäljendades II tüüpi alveolaarrakkude funktsiooni aspekte. Kuigi see sekretsioon on varajases staadiumis tugev, väheneb see hilisemas staadiumis koos muutustega retseptor-vahendatud reaktsioonides. See mudel on eriti väärtuslik hingamishäirete ja pindaktiivse aine puudulikkuse aluseks olevate mehhanismide uurimiseks. Lisaks pakub see rakuliin teadmisi kopsukartsinogeneesi kohta, kuna see pärineb SV40-juhitud kasvajate tekkest.

MLE-12 rakud on vahendiks surfaktandi valkude töötlemise radade selgitamisel ja surfaktandi asendamise terapeutiliste strateegiate katsetamisel. Nende SP-C ekspressiooni säilitamine, mis on alveolaarepiteelile iseloomulik marker, teeb neist asjakohase in vitro mudeli kopsuspetsiifiliste protsesside ja haiguste uurimiseks.

Kude
Kopsud
Haigus
Tavaline
Sünonüümid
  • MLE 12
  • MLE12
  • Murine Lung Epithelial-12

02Klassifikatsioon

Organism
Hiir
Sugu
Naine
Kasvuvõime
Järgija
GMO-staatus
GMO-S1
GMO-staatuse üksikasjad
GMO-S1: This murine lung epithelial cell line (MLE-12) contains an SV40 T-Antigen construct introduced via transfection, supporting immortalization of primary lung epithelial cells. The insert is stably integrated. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Morfoloogia
Epiteelilaadsed
Rakutüüp
Epiteelirakk
Tuumorigeenne
Jah, alasti hiirtel

04Tunnused

Viide
MLE-12 (Cytioni katalooginumber 305314)
NCBI maksukood
10090
Cellosaurus
CVCL_3751

05Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Valgu ekspressioon
Ekspresseeritud geenid: kopsu pindaktiivsed valgud B, C (SP-B, SP-C)
Viirused
Transformant: simian virus 40 (SV40)

06Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
DMEM, w: 4,5 g/L glükoosi, w: 4 mM L-glutamiini, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM naatriumpüruvaati (Cytioni artikli number 820300a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS-ga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Vedeliku vahetus
2 korda nädalas
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

08Annetaja

Tõug / alamliik
FVB/N-Tg(SFTPC-TAg)5.1Jaw transgeeniline
Doonori vanus
5 kuud

10Toote üksikasjad

Koostis tabel