MLE-12

A MLE-12 é uma linha celular epitelial pulmonar murina estabelecida a partir do epitélio respiratório distal, utilizando ratinhos transgénicos que expressam o antigénio tumoral grande do vírus símio 40 (SV40) sob o controlo do promotor da proteína C do surfactante humano (SP-C). Esta linha celular é caracterizada pela sua capacidade de manter certas propriedades das células alveolares do tipo II, como a expressão das proteínas surfactantes SP-B e SP-C, que são cruciais para a síntese do surfactante pulmonar e para a função pulmonar. As células MLE-12 também apresentam as principais caraterísticas morfológicas das células alveolares de tipo II, incluindo microvilosidades e corpos multivesiculares, embora lhes faltem algumas caraterísticas como os corpos lamelares em passagens posteriores.

A linha celular MLE-12 é amplamente utilizada para estudar a regulação da proteína surfactante, a secreção e as respostas pulmonares a estímulos. Secreta fosfolípidos em resposta a vários secretagogos, como o ATP e os ésteres de forbol, imitando aspectos da função das células alveolares do tipo II. Embora esta secreção seja robusta nas primeiras passagens, diminui em passagens posteriores, juntamente com alterações nas respostas mediadas por receptores. Este modelo é particularmente valioso para explorar os mecanismos subjacentes às síndromes de dificuldade respiratória e às deficiências de surfactante. Além disso, a linha celular oferece conhecimentos sobre a carcinogénese pulmonar, dada a sua derivação da tumorigénese provocada pelo SV40.

As células MLE-12 servem como ferramenta para elucidar as vias de processamento da proteína surfactante e testar estratégias terapêuticas para a substituição do surfactante. A sua manutenção da expressão de SP-C, um marcador específico do epitélio alveolar, torna-as um modelo in vitro relevante para a investigação de processos e doenças específicos do pulmão.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia