Siirry sisältöön
HT22
Kudos
Aivot, hippokampus
Synonyymit
HT-22

Asiakirjat

HT22

Cell line · Tuotenumero 305158

The HT22 cell line, an immortalized subclone derived from HT4 cells of the mouse hippocampus, is pivotal in neuropharmacological research. Originating thr...

€800.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
  • CoA
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus

HT22-solulinja, hiiren hippokampuksen HT4-soluista peräisin oleva kuolematon aliklooni, on keskeisessä asemassa neurofarmakologisessa tutkimuksessa. HT22-solut ovat peräisin hiiren hermosolukudosten kuolemattomaksi tekemisestä lämpötilaherkällä SV40 T-antigeenillä, ja ne tarjoavat ainutlaatuisen in vitro -mallin glutamaatin aiheuttaman sytotoksisuuden taustalla olevien mekanismien tutkimiseen, sillä glutamaatilla on merkittävä rooli neurodegeneratiivisissa sairauksissa, kuten Alzheimerin, Huntingtonin ja Parkinsonin taudeissa.

HT22-soluilla on neuronaalinen fenotyyppi, ja ne ovat erittäin herkkiä glutamaatille, joka on olennainen kiihdyttävä välittäjäaine, joka osallistuu kriittisiin aivotoimintoihin, kuten kognitioon, oppimiseen ja muistiin. Liiallinen glutamaatin saanti voi kuitenkin johtaa glutamaattitoksisuuteen ja hermosolujen yliherkistymiseen, mikä aiheuttaa soluvaurioita tai kuolemaa mekanismien kautta, joihin liittyy oksidatiivista stressiä ja apoptoosia.

HT22-hiiren hippokampussoluja käytetään neurotoksisuustutkimuksissa, kuten isofluraanialtistuksen vaikutuksia tutkittaessa, kromatiinimaiseman ja epigeneettisten merkkien tutkimiseen sekä serotonergisen vaikutuksen tutkimiseen hippokampuksen neurogeneesiin. Jälkimmäiseen kuuluu serotoniinin takaisinoton estäjien ja niiden roolin tutkiminen masennuslääkkeiden seulonnassa sekä serotoniinikuljettajan (SERT) glykosylaation vaikutus hermosolujen toimintaan.

HT22-solulinja, jonka glutamaattivaste on hyvin karakterisoitu ja joka on käyttökelpoinen serotonergisen järjestelmän tutkimisessa, on edelleen arvokas väline neurofarmakologian edistämisessä ja useiden neurologisten sairauksien hoitojen kehittämisessä.

Kudos
Aivot, hippokampus
Synonyymit
  • HT-22

02Luokittelu

Organismi
Hiiri
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
GMO-status
GMO-S1
GMO-statuksen tiedot
GMO-S1: This murine hippocampal neuronal cell line (HT22) contains a retroviral construct encoding temperature-sensitive SV40 T-Antigen, supporting conditional immortalization. The insert is stably present in neuronal precursor cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Epiteeli

04Tunnisteet

Lähdeviite
HT22 (Cytion-tuotenumero 305158)
NCBI-verotunnus
10090
Cellosaurus
CVCL_0321

05Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
DMEM, w: 4,5 g/l glukoosia, w: 4 mM L-glutamiinia, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM natriumpyruvaattia (Cytionin artikkelinumero 820300a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 10 %:lla FBS:llä
Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme 50 % perusmediaa + 40 % FBS + 10 % DMSO:ta eli CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytysstressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.