Pāriet uz saturu
HT22
Audums
Smadzenes, hipokamps
Sinonīmi
HT-22

Dokumenti

HT22

Cell line · Preces numurs 305158

The HT22 cell line, an immortalized subclone derived from HT4 cells of the mouse hippocampus, is pivotal in neuropharmacological research. Originating thr...

€800.00bez nodokļa un piegādes izmaksām
Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

HT22 šūnu līnija - imortizēts subklons, kas iegūts no peles hipokampusa HT4 šūnām - ir ļoti svarīga neirofarmakoloģiskajos pētījumos. HT22 šūnas, kas radušās, imortalizējot peļu neironu audus ar temperatūras jutīgu SV40 T-antigēnu, ir unikāls in vitro modelis, lai pētītu mehānismus, kas ir pamatā glutamāta izraisītajai citotoksicitātei, kurai ir nozīmīga loma neirodeģeneratīvo slimību, piemēram, Alcheimera, Hantingtona un Parkinsona slimību, gadījumā.

HT22 šūnām piemīt neironu fenotips, un tās ir ļoti jutīgas pret glutamātu - būtisku uzbudinošu neiromediatoru, kas ir iesaistīts tādās svarīgās smadzeņu funkcijās kā izziņa, mācīšanās un atmiņa. Tomēr pārmērīga glutamāta uzņemšana var izraisīt glutamāta toksicitāti un nervu šūnu pārmērīgu uzbudinājumu, izraisot šūnu bojājumus vai nāvi, izmantojot mehānismus, kas ietver oksidatīvo stresu un apoptozi.

HT22 peļu hipokampa šūnas izmanto neirotoksicitātes pētījumos, piemēram, pētījumos par izoflurāna iedarbības ietekmi, lai izpētītu hromatīna ainavu un epigenētiskās pazīmes, kā arī lai izpētītu serotonīnerģiskās iedarbības ietekmi uz hipokampa neirogēzi. Pēdējā no šīm darbībām ietver serotonīna atpakaļsaistes inhibitoru izpēti un to nozīmi antidepresantu skrīningā, kā arī serotonīna transportiera (SERT) glikozilēšanas ietekmi uz neironu darbību.

HT22 šūnu līnija ar tās labi raksturoto reakciju uz glutamātu un lietderību serotonīnerģiskās sistēmas izpētē joprojām ir vērtīgs instruments neirofarmakoloģijas attīstībā un dažādu neiroloģisku traucējumu ārstēšanas līdzekļu izstrādē.

Audums
Smadzenes, hipokamps
Sinonīmi
  • HT-22

02Klasifikācija

Organisms
Pele
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
ĢMO statuss
GMO-S1
Sīkāka informācija par ĢMO statusu
GMO-S1: This murine hippocampal neuronal cell line (HT22) contains a retroviral construct encoding temperature-sensitive SV40 T-Antigen, supporting conditional immortalization. The insert is stably present in neuronal precursor cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Epitēlija

04Identifikatori

Atsauce
HT22 (Cytion kataloga numurs 305158)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
10090
Cellosaurus
CVCL_0321

05Apstrāde un audzēšana

Barotne
DMEM, w: 4,5 g/l glikozes, w: 4 mM L-glutamīna, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM nātrija piruvāta (Cytion izstrādājuma numurs 820300a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam 50 % bāzes barotni + 40 % FBS + 10 % DMSO vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu reģenerāciju un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.