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HT22
Tessuto
Cervello, ippocampo
Sinonimi
HT-22

Documenti

HT22

Cell line · Codice prodotto 305158

The HT22 cell line, an immortalized subclone derived from HT4 cells of the mouse hippocampus, is pivotal in neuropharmacological research. Originating thr...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare HT22, un sottoclone immortalizzato derivato dalle cellule HT4 dell'ippocampo di topo, è fondamentale nella ricerca neurofarmacologica. Nate dall'immortalizzazione di tessuti neuronali di topo con un antigene T SV40 sensibile alla temperatura, le cellule HT22 offrono un modello unico in vitro per studiare i meccanismi alla base della citotossicità indotta dal glutammato, che svolge un ruolo significativo nei disturbi neurodegenerativi come l'Alzheimer, la Corea di Huntington e il Parkinson.

Le cellule HT22 presentano un fenotipo neuronale e sono altamente sensibili al glutammato, un neurotrasmettitore eccitatorio essenziale coinvolto in funzioni cerebrali critiche come la cognizione, l'apprendimento e la memoria. Tuttavia, l'assunzione eccessiva di glutammato può portare alla tossicità del glutammato e alla sovraeccitazione delle cellule nervose, causando danni o morte cellulare attraverso meccanismi che coinvolgono lo stress ossidativo e l'apoptosi.

Le cellule ippocampali di topo HT22 sono impiegate in studi di neurotossicità, come quelli che esaminano gli effetti dell'esposizione all'isoflurano, per esplorare il paesaggio cromatinico e le firme epigenetiche e per esaminare gli effetti dell'input serotoninergico sulla neurogenesi ippocampale. Quest'ultima include lo studio degli inibitori della ricaptazione della serotonina e il loro ruolo nello screening degli antidepressivi, nonché l'impatto della glicosilazione del trasportatore della serotonina (SERT) sulla funzione neuronale.

La linea cellulare HT22, con la sua risposta ben caratterizzata al glutammato e la sua utilità nello studio del sistema serotoninergico, continua a essere uno strumento prezioso per il progresso della neurofarmacologia e lo sviluppo di trattamenti per una serie di disturbi neurologici.

Tessuto
Cervello, ippocampo
Sinonimi
  • HT-22

02Classificazione

Organismo
Mouse
Proprietà di crescita
Aderente
Presenza di OGM
GMO-S1
Dettagli sullo stato degli OGM
GMO-S1: This murine hippocampal neuronal cell line (HT22) contains a retroviral construct encoding temperature-sensitive SV40 T-Antigen, supporting conditional immortalization. The insert is stably present in neuronal precursor cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Epiteliale

04Identificatori

Riferimento bibliografico
HT22 (numero di catalogo Cytion 305158)
Codice fiscale NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_0321

05Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 3,7 g/L di NaHCO3, w: 1,0 mM di piruvato di sodio (articolo Cytion numero 820300a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo 50% di terreno basale + 40% di FBS + 10% di DMSO, o CM-1 (Cytion numero di catalogo 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crioindotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.