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HT22
Tecido
Cérebro, hipocampo
Sinónimos
HT-22

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HT22

Cell line · Número do produto 305158

The HT22 cell line, an immortalized subclone derived from HT4 cells of the mouse hippocampus, is pivotal in neuropharmacological research. Originating thr...

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01Informações gerais

Descrição

A linha celular HT22, um subclone imortalizado derivado das células HT4 do hipocampo do rato, é fundamental na investigação neurofarmacológica. Originadas através da imortalização de tecidos neuronais do rato com um antigénio SV40 T sensível à temperatura, as células HT22 oferecem um modelo in vitro único para investigar os mecanismos subjacentes à citotoxicidade induzida pelo glutamato, que desempenha um papel significativo em doenças neurodegenerativas como as doenças de Alzheimer, Huntington e Parkinson.

As células HT22 exibem um fenótipo neuronal e são altamente sensíveis ao glutamato, um neurotransmissor excitatório essencial envolvido em funções cerebrais críticas como a cognição, a aprendizagem e a memória. Contudo, a ingestão excessiva de glutamato pode levar à toxicidade do glutamato e à sobre-excitação das células nervosas, causando danos ou morte celular através de mecanismos que envolvem o stress oxidativo e a apoptose.

As células do hipocampo do rato HT22 são utilizadas em estudos de neurotoxicidade, como os que examinam os efeitos da exposição ao isoflurano, para explorar a paisagem da cromatina e as assinaturas epigenéticas, e para examinar os efeitos do input serotoninérgico na neurogénese do hipocampo. Este último inclui o estudo dos inibidores da recaptação da serotonina e o seu papel no rastreio de antidepressivos, bem como o impacto da glicosilação do transportador de serotonina (SERT) na função neuronal.

A linha celular HT22, com a sua resposta bem caracterizada ao glutamato e a sua utilidade no estudo do sistema serotoninérgico, continua a ser uma ferramenta valiosa para o avanço da neurofarmacologia e o desenvolvimento de tratamentos para uma série de perturbações neurológicas.

Tecido
Cérebro, hipocampo
Sinónimos
  • HT-22

02Classificação

Organismo
Rato
Propriedades de crescimento
Aderente
Estatuto em matéria de OGM
GMO-S1
Detalhes sobre o estatuto dos OGM
GMO-S1: This murine hippocampal neuronal cell line (HT22) contains a retroviral construct encoding temperature-sensitive SV40 T-Antigen, supporting conditional immortalization. The insert is stably present in neuronal precursor cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
Epitelial

04Identificadores

Referência
HT22 (número de catálogo da Cytion 305158)
Número de identificação fiscal do NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_0321

05Manuseamento e cultura

Meio de cultura
DMEM, com: 4,5 g/L de glucose, com: 4 mM de L-Glutamina, com: 3,7 g/L de NaHCO3, com: 1,0 mM de piruvato de sódio (número de artigo Cytion 820300a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos 50% de meio basal + 40% de FBS + 10% de DMSO, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.