B-LCL-HROC68

B-LCL-HROC68 est une lignée cellulaire lymphoblastique B humaine immortalisée par le virus d'Epstein-Barr (EBV), établie à partir de cellules B infiltrant la tumeur (TiBc) isolées d'un carcinome colorectal primaire désigné HROC68. La tumeur parentale était un carcinome colorectal de type sporadique réséqué chez un patient adulte de sexe masculin atteint d'une maladie à un stade avancé. Le tissu tumoral frais a été dissocié mécaniquement et les cellules B ont été cultivées en présence d'un surnageant contenant l'EBV dérivé de la lignée cellulaire B95/8 de marmouset, ainsi que de la cyclosporine A pour supprimer la croissance des cellules T et NK. La culture à long terme a entraîné une expansion monoclonale des cellules B, comme l'a confirmé l'analyse du réarrangement des gènes d'immunoglobulines à l'aide des protocoles de PCR multiplex BIOMED-2, démontrant un seul schéma de réarrangement dominant compatible avec une origine clonale.

B-LCL-HROC68 sécrète de l'immunoglobuline G (IgG) comme isotype exclusif, avec une production stable pendant une culture prolongée. Lors d'un criblage ELISA cellulaire contre des lignées cellulaires allogéniques de cancer colorectal (HROC24, HROC46 et HCT116), l'IgG dérivée de B-LCL-HROC68 a démontré une liaison mesurable aux cellules tumorales, le signal le plus fort étant observé contre les cellules HCT116. Cependant, la validation cytométrique en flux ultérieure a indiqué une affinité de liaison relativement faible par rapport aux autres IgG dérivées de TiBc. Ces résultats indiquent que B-LCL-HROC68 représente une lignée de cellules B monoclonal, expérimentée en matière d'antigènes et infiltrant les tumeurs, capable de produire des IgG fonctionnelles avec une réactivité détectable des cellules tumorales, fournissant ainsi un outil in vitro utile pour étudier les réponses immunitaires humorales dans le microenvironnement du carcinome colorectal et pour l'identification potentielle d'antigènes associés aux tumeurs.

37°C, 5%_CO2, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes basées sur la luminescence.

Pour s'assurer de l'absence de contamination bactérienne, fongique ou levurienne, les cultures cellulaires font l'objet d'inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placer les flacons dans de l'azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre -150 et -196 °C environ. Le stockage à -80 °C n'est acceptable qu'en tant qu'étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l'azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées sur glace sèche dans des emballages isolés et validés, avec suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d'environ -78 °C tout au long du transport. À la réception, inspecter immédiatement le conteneur et transférer sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous nous portons garants de la qualité et de la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours après l'expédition de nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d'analyse et/ou la fiche produit

Pour plus de détails, veuillez consulter notre <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default""> Déclaration de garantie