B-LCL-HROC68

B-LCL-HROC68 е имунизирана с вируса на Епщайн-Бар (EBV) човешка B лимфобластоидна клетъчна линия, създадена от туморни инфилтриращи B клетки (TiBc), изолирани от първичен колоректален карцином, обозначен като HROC68. Родителският тумор е колоректален карцином от спорадичен тип, резециран от възрастен мъж с напреднало заболяване. Свежата туморна тъкан е била механично разградена, а В-клетките са били култивирани в присъствието на супернатант, съдържащ EBV, получен от клетъчната линия B95/8 на мармозет, заедно с циклоспорин А за потискане на растежа на Т- и NK-клетки. Дългосрочната култура доведе до моноклонално разширяване на В-клетките, което бе потвърдено чрез анализ на пренареждане на имуноглобулинови гени, използвайки BIOMED-2 мултиплексни PCR протоколи, демонстрирайки единствен доминиращ модел на пренареждане, съответстващ на клонален произход.

B-LCL-HROC68 секретира имуноглобулин G (IgG) като свой изключителен изотип, със стабилна продукция при продължителна култура. При клетъчен ELISA скрининг срещу алогенни колоректални ракови клетъчни линии (HROC24, HROC46 и HCT116), IgG, получен от B-LCL-HROC68, демонстрира измеримо свързване с туморни клетки, като най-силен сигнал се наблюдава срещу HCT116 клетки. Въпреки това, последващата валидация с проточна цитометрия показа сравнително слаба афинитет на свързване в сравнение с други IgG, получени от TiBc. Тези резултати показват, че B-LCL-HROC68 представлява моноклонална, антигенно-опитна тумор-инфилтрираща B-клетъчна линия, способна да произвежда функционален IgG с откриваема реактивност към туморни клетки, предоставяйки полезен in vitro инструмент за изследване на хуморалните имунни реакции в микросредата на колоректалния карцином и за потенциална идентификация на тумор-асоциирани антигени.

37°C, 5%_CO2, овлажнена атмосфера.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Замърсяването с микоплазма се изключва както чрез PCR-базирани анализи, така и чрез луминесцентни методи за откриване на микоплазма.

За да се гарантира, че няма бактериално, гъбично или дрождево замърсяване, клетъчните култури се подлагат на ежедневни визуални проверки.

За дълготрайно съхранение поставете флаконите в течен азот в парна фаза при температура около -150 до -196 °C. Съхранението при -80 °C е приемливо само като кратък междинен етап преди прехвърлянето в течен азот.

Криоконсервираните клетъчни линии се транспортират върху сух лед в утвърдени, изолирани опаковки с достатъчно хладилен агент, за да се поддържа приблизително -78 °C по време на транспортирането. При получаването незабавно прегледайте опаковката и незабавно прехвърлете флаконите за подходящо съхранение.

Ние в Cytion заставаме зад качеството и жизнеспособността на нашите продукти. Гарантираме, че нашите клетки ще бъдат жизнеспособни в началото на култивирането в продължение на 60 дни след изпращането им от нашите съоръжения. Гарантираме, че всички материали отговарят на спецификациите, описани в сертификата за анализ и/или продуктовата листа

За пълни подробности, моля, направете справка с нашата <a href=""/Кои сме ние/Гаранция/"" hreflang=""x-default"">Гаранционна декларация