B-LCL-HROC68

B-LCL-HROC68 ist eine durch das Epstein-Barr-Virus (EBV) immortalisierte humane B-Lymphoblastoid-Zelllinie, die aus tumorinfiltrierenden B-Zellen (TiBc) etabliert wurde, die aus einem primären kolorektalen Karzinom mit der Bezeichnung HROC68 isoliert wurden. Der Ausgangstumor war ein sporadisches kolorektales Karzinom, das bei einem erwachsenen männlichen Patienten mit fortgeschrittener Erkrankung reseziert wurde. Das frische Tumorgewebe wurde mechanisch dissoziiert, und die B-Zellen wurden in Gegenwart von EBV-haltigem Überstand aus der B95/8-Marmoset-Zelllinie zusammen mit Cyclosporin A kultiviert, um das Wachstum von T- und NK-Zellen zu unterdrücken. Die Langzeitkultur führte zu einer monoklonalen Expansion der B-Zellen, was durch eine Immunglobulin-Gen-Rearrangement-Analyse unter Verwendung von BIOMED-2-Multiplex-PCR-Protokollen bestätigt wurde, die ein einziges dominantes Rearrangement-Muster zeigte, das mit einem klonalen Ursprung übereinstimmt.

B-LCL-HROC68 sekretiert Immunglobulin G (IgG) als exklusiven Isotyp mit stabiler Produktion über eine längere Kultivierungsdauer. In einem zellbasierten ELISA-Screening gegen allogene Darmkrebszelllinien (HROC24, HROC46 und HCT116) zeigte das aus B-LCL-HROC68 stammende IgG eine messbare Tumorzellbindung, wobei das stärkste Signal gegen HCT116-Zellen beobachtet wurde. Die anschließende durchflusszytometrische Validierung ergab jedoch eine vergleichsweise schwache Bindungsaffinität im Vergleich zu anderen aus TiBc stammenden IgGs. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass B-LCL-HROC68 eine monoklonale, antigenerfahrene, tumorinfiltrierende B-Zelllinie darstellt, die in der Lage ist, funktionelles IgG mit nachweisbarer Tumorzellreaktivität zu produzieren, und somit ein nützliches In-vitro-Werkzeug für die Untersuchung humoraler Immunantworten innerhalb der Mikroumgebung von kolorektalen Karzinomen und für die potenzielle Identifizierung tumorassoziierter Antigene darstellt.

37°C, 5%_CO2, befeuchtete Atmosphäre.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

Bei Cytion stehen wir hinter der Qualität und Lebensfähigkeit unserer Produkte. Wir garantieren, dass unsere Zellen zu Beginn der Kultur für 60 Tage nach dem Versand aus unseren Einrichtungen lebensfähig sind. Wir versichern, dass alle Materialien mit den im Analysezertifikat und/oder Produktblatt beschriebenen Spezifikationen übereinstimmen

Ausführliche Informationen finden Sie in unserer <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantieerklärung