B-LCL-HROC68

B-LCL-HROC68 là dòng tế bào lymphoblastoid B người được bất tử hóa bởi virus Epstein-Barr (EBV), được thiết lập từ các tế bào B xâm nhập khối u (TiBc) được tách ra từ khối u đại trực tràng nguyên phát mang tên HROC68. Khối u gốc là một khối u đại trực tràng loại sporadic được phẫu thuật cắt bỏ từ một bệnh nhân nam trưởng thành mắc bệnh ở giai đoạn tiến triển. Mô khối u tươi được phân tách cơ học, và các tế bào B được nuôi cấy trong môi trường chứa dịch siêu vi EBV từ dòng tế bào B95/8 của khỉ marmoset, cùng với cyclosporin A để ức chế sự phát triển của các tế bào T và NK. Nuôi cấy lâu dài dẫn đến sự mở rộng đơn dòng của tế bào B, được xác nhận bằng phân tích sắp xếp gen immunoglobulin sử dụng các giao thức PCR đa mồi BIOMED-2, cho thấy một mẫu sắp xếp đơn dòng thống trị phù hợp với nguồn gốc đơn dòng.

B-LCL-HROC68 tiết ra immunoglobulin G (IgG) như là isotype duy nhất, với sản xuất ổn định trong suốt quá trình nuôi cấy kéo dài. Trong sàng lọc ELISA dựa trên tế bào đối với các dòng tế bào ung thư đại tràng dị gen (HROC24, HROC46 và HCT116), IgG được sản xuất từ B-LCL-HROC68 cho thấy khả năng gắn kết với tế bào ung thư có thể đo lường được, với tín hiệu mạnh nhất được quan sát trên tế bào HCT116. Tuy nhiên, xác minh bằng cytometrie dòng sau đó cho thấy khả năng gắn kết tương đối yếu so với các IgG khác được sản xuất từ TiBc. Các kết quả này cho thấy B-LCL-HROC68 là một dòng tế bào B xâm nhập khối u đơn dòng, đã tiếp xúc với kháng nguyên, có khả năng sản xuất IgG chức năng với phản ứng có thể phát hiện được với tế bào khối u, cung cấp một công cụ hữu ích trong ống nghiệm để nghiên cứu phản ứng miễn dịch dịch thể trong vi môi trường ung thư đại trực tràng và để xác định tiềm năng các kháng nguyên liên quan đến khối u.

37°C, 5%_CO₂, môi trường ẩm.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Sự nhiễm khuẩn Mycoplasma được loại trừ bằng cả các phương pháp xét nghiệm dựa trên PCR và các phương pháp phát hiện Mycoplasma dựa trên phát quang.

Để đảm bảo không có nhiễm khuẩn vi khuẩn, nấm hoặc men, các mẫu nuôi cấy tế bào được kiểm tra trực quan hàng ngày.

Để bảo quản lâu dài, hãy đặt ống nghiệm vào nitơ lỏng ở pha hơi ở nhiệt độ khoảng −150 đến −196 °C. Việc bảo quản ở −80 °C chỉ được chấp nhận như một bước trung gian ngắn hạn trước khi chuyển sang nitơ lỏng.

Các dòng tế bào được bảo quản bằng phương pháp đông lạnh được vận chuyển trên đá khô trong bao bì cách nhiệt đã được kiểm định, kèm theo lượng chất làm lạnh đủ để duy trì nhiệt độ khoảng −78 °C trong suốt quá trình vận chuyển. Khi nhận hàng, hãy kiểm tra ngay lập tức bao bì và chuyển các ống nghiệm sang nơi lưu trữ phù hợp mà không chậm trễ.

Tại Cytion, chúng tôi cam kết về chất lượng và khả năng sống của các sản phẩm của mình. Chúng tôi đảm bảo rằng các tế bào của chúng tôi sẽ có khả năng sống tại thời điểm bắt đầu nuôi cấy trong 60 ngày kể từ khi vận chuyển từ cơ sở của chúng tôi. Chúng tôi cam kết rằng tất cả các vật liệu tuân thủ các thông số kỹ thuật được mô tả trong Giấy chứng nhận phân tích và/hoặc Tài liệu sản phẩm.

Để biết chi tiết đầy đủ, vui lòng tham khảo <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Tuyên bố Bảo hành.