B-LCL-HROC68

A B-LCL-HROC68 egy Epstein-Barr vírus (EBV) által halhatatlanná tett humán B-limfoblasztos sejtvonal, amelyet HROC68 nevű primer kolorektális karcinómából izolált tumorbehatoló B-sejtekből (TiBc) hoztak létre. A szülői tumor egy sporadikus típusú kolorektális karcinóma volt, amelyet egy előrehaladott stádiumú betegségben szenvedő felnőtt férfi páciensből reszekáltak. A friss tumor szövetet mechanikusan szétválasztották, és a B sejteket EBV-t tartalmazó felülúszó folyadék jelenlétében tenyésztették, amely a B95/8 marmoset sejtvonalból származott, ciklosporin A-val együtt, hogy elnyomják a T és NK sejtek növekedését. A hosszú távú tenyésztés a B-sejtek monoklonális szaporodását eredményezte, amit a BIOMED-2 multiplex PCR protokollok alkalmazásával végzett immunglobulin génátrendeződés-elemzés is megerősített, és amely egyetlen domináns átrendeződési mintát mutatott, ami összhangban áll a klónális eredettel.

A B-LCL-HROC68 kizárólagos izotípusként immunglobulin G-t (IgG) szekretál, amelynek termelése a hosszan tartó tenyésztés során stabil marad. Az allogén kolorektális rákos sejtvonalak (HROC24, HROC46 és HCT116) elleni sejtalapú ELISA szűrés során a B-LCL-HROC68-ból származó IgG mérhető tumorsejt-kötődést mutatott, a legerősebb jel a HCT116 sejtek ellen volt megfigyelhető. Az ezt követő áramlási citometriás validálás azonban más TiBc-ből származó IgG-khez képest viszonylag gyenge kötődési affinitást mutatott. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a B-LCL-HROC68 egy monoklonális, antigénnel tapasztalt, tumorba behatoló B-sejtvonal, amely képes funkcionális IgG termelésére, amelynek tumorsejt-reaktivitása kimutatható, és amely hasznos in vitro eszköz a kolorektális karcinóma mikrokörnyezetén belüli humorális immunválaszok vizsgálatához és a tumorral kapcsolatos antigének potenciális azonosításához.

37°C, 5%_CO2, párásított légkör.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják.

A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá.

Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.

A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.

A Cytionnál kiállunk termékeink minősége és életképessége mellett. Garantáljuk, hogy sejtjeink a tenyésztés megkezdésekor életképesek lesznek, a létesítményünkből történő kiszállítás után 60 napig. Biztosítjuk, hogy minden anyag megfelel az analitikai tanúsítványban és/vagy a terméklapon leírt specifikációknak

A teljes részleteket lásd <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Garancia nyilatkozatunkban