B-LCL-HROC68

B-LCL-HROC68 es una línea celular linfoblastoide B humana inmortalizada por el virus de Epstein-Barr (VEB), establecida a partir de células B infiltrantes de tumor (TiBc) aisladas de un carcinoma colorrectal primario denominado HROC68. El tumor parental era un carcinoma colorrectal de tipo esporádico extirpado de un paciente adulto del sexo masculino con enfermedad en etapa avanzada. El tejido tumoral fresco se disoció mecánicamente, y las células B se cultivaron en presencia de un sobrenadante que contenía el VEB, derivado de la línea celular de marmoseta B95/8, junto con ciclosporina A para suprimir el crecimiento de las células T y NK. El cultivo a largo plazo dio lugar a la expansión monoclonal de las células B, lo cual se confirmó mediante un análisis de reordenamiento de genes de inmunoglobulina utilizando protocolos de PCR multiplex BIOMED-2, lo que demostró un único patrón de reordenamiento dominante consistente con un origen clonal.

La B-LCL-HROC68 secreta inmunoglobulina G (IgG) como su isotipo exclusivo, con una producción estable durante el cultivo prolongado. En un cribado ELISA basado en células contra líneas celulares de cáncer colorrectal alogénico (HROC24, HROC46 y HCT116), la IgG derivada de B-LCL-HROC68 demostró una unión medible a las células tumorales, observándose la señal más fuerte contra las células HCT116. Sin embargo, la validación posterior mediante citometría de flujo indicó una afinidad de unión comparativamente débil en relación con otras IgG derivadas de TiBc. Estos hallazgos indican que B-LCL-HROC68 representa una línea celular de células B monoclonales, con experiencia en antígenos, capaz de producir IgG funcional con reactividad detectable hacia las células tumorales, lo que proporciona una herramienta útil in vitro para investigar las respuestas inmunitarias humorales dentro del microambiente del carcinoma colorrectal y para la posible identificación de antígenos asociados al tumor.

37 °C, 5 % de CO₂, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Se descarta la contaminación por micoplasmas mediante ensayos basados en PCR y métodos de detección de micoplasmas basados en luminiscencia.

Para garantizar que no haya contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, coloque los viales en nitrógeno líquido en fase de vapor a una temperatura de entre −150 y −196 °C, aproximadamente. El almacenamiento a −80 °C solo es aceptable como un paso intermedio breve antes de transferirlos al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares criopreservadas se envían en hielo seco, en un embalaje aislante validado que contiene suficiente refrigerante para mantener una temperatura de aproximadamente −78 °C durante todo el transporte. Al recibir el envío, revise el contenedor de inmediato y traslade los viales sin demora al lugar de almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y la viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante 60 días a partir de la fecha de envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales cumplen con las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o la Ficha del Producto.

Para obtener más detalles, consulte nuestra Declaración de garantía.