B-LCL-HROC68

La lignée cellulaire B-LCL-HROC68 est une lignée de lymphoblastes B humains immortalisée par le virus d’Epstein-Barr (EBV), issue de lymphocytes B infiltrant la tumeur (TiBc) isolés à partir d’un carcinome colorectal primaire désigné HROC68. La tumeur d’origine était un carcinome colorectal de type sporadique réséqué chez un patient adulte de sexe masculin atteint d’une maladie à un stade avancé. Le tissu tumoral frais a été dissocié mécaniquement, et les cellules B ont été cultivées en présence d’un surnageant contenant l’EBV, dérivé de la lignée cellulaire de marmouset B95/8, en association avec de la cyclosporine A afin d’inhiber la prolifération des cellules T et NK. La culture à long terme a entraîné une expansion monoclonale des cellules B, comme l’a confirmé l’analyse du réarrangement des gènes d’immunoglobulines à l’aide des protocoles de PCR multiplex BIOMED-2, démontrant un profil de réarrangement dominant unique compatible avec une origine clonale.

La lignée B-LCL-HROC68 sécrète exclusivement de l’immunoglobuline G (IgG), dont la production reste stable tout au long de la culture prolongée. Lors d’un criblage par ELISA sur cellules contre des lignées cellulaires allogéniques de cancer colorectal (HROC24, HROC46 et HCT116), l’IgG dérivée de B-LCL-HROC68 a démontré une liaison mesurable aux cellules tumorales, le signal le plus fort ayant été observé contre les cellules HCT116. Cependant, une validation ultérieure par cytométrie en flux a révélé une affinité de liaison relativement faible par rapport à d’autres IgG dérivées de TiBc. Ces résultats indiquent que la lignée B-LCL-HROC68 représente une lignée de cellules B monoclonales, ayant déjà été exposée à des antigènes et capable de produire des IgG fonctionnelles présentant une réactivité détectable vis-à-vis des cellules tumorales, ce qui en fait un outil in vitro utile pour étudier les réponses immunitaires humorales au sein du microenvironnement du carcinome colorectal et pour l’identification potentielle d’antigènes associés à la tumeur.

37 °C, 5 % _de CO_₂, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.

Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.

Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.