B-LCL-HROC68

B-LCL-HROC68 on Epstein-Barr-viruksen (EBV) avulla ikuistettu ihmisen B-lymfoblastoidinen solulinja, joka on perustettu primaarisesta kolorektaalisesta karsinoomasta, nimeltään HROC68, eristetyistä tuumoriin tunkeutuneista B-soluista (TiBc). Emotuumori oli sporadinen kolorektaalinen karsinooma, joka oli resektoitu aikuiselta miespotilaalta, jolla oli pitkälle edennyt tauti. Tuore kasvainkudos hajotettiin mekaanisesti, ja B-soluja viljeltiin EBV:tä sisältävän supernatantissa, joka oli peräisin B95/8-marmosettisolulinjasta, yhdessä syklosporiini A:n kanssa T- ja NK-solujen kasvun estämiseksi. Pitkäaikainen viljely johti B-solujen monoklonaaliseen lisääntymiseen, mikä vahvistettiin immunoglobuliinigeenien uudelleenjärjestäytymisanalyysillä BIOMED-2-multiplex-PCR-protokollia käyttäen. Analyysi osoitti yhden hallitsevan uudelleenjärjestäytymismallin, joka oli yhdenmukainen kloonisen alkuperän kanssa.

B-LCL-HROC68 erittää immunoglobuliini G:tä (IgG) ainoana isotyyppinään, ja sen tuotanto on vakaata pitkittyneen viljelyn aikana. Solupohjaisessa ELISA-seulonnassa allogeenisia kolorektaalisyöpäsolulinjoja (HROC24, HROC46 ja HCT116) vastaan B-LCL-HROC68:sta peräisin oleva IgG osoitti mitattavissa olevaa tuumorisolujen sitoutumista, ja voimakkain signaali havaittiin HCT116-soluja vastaan. Myöhempi virtaussytometrinen validointi osoitti kuitenkin suhteellisen heikon sitoutumisaffiniteetin verrattuna muihin TiBc:stä peräisin oleviin IgG:ihin. Nämä havainnot osoittavat, että B-LCL-HROC68 edustaa monoklonaalista, antigeenikokemusta omaavaa tuumoriin tunkeutuvaa B-solulinjaa, joka kykenee tuottamaan toiminnallista IgG:tä, jolla on havaittavissa oleva tuumorisolujen reaktiivisuus. Se tarjoaa hyödyllisen in vitro -työkalun kolorektaalisen karsinooman mikroympäristön humoraalisten immuunivasteiden tutkimiseen ja tuumoriin liittyvien antigeenien mahdolliseen tunnistamiseen.

37 °C, 5 %_CO2, kostutettu ilmakehä.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

Me Cytionilla seisomme tuotteidemme laadun ja elinkelpoisuuden takana. Takaamme, että solumme ovat elinkelpoisia viljelyn alkaessa 60 päivän ajan sen jälkeen, kun ne on lähetetty laitoksestamme. Vakuutamme, että kaikki materiaalit ovat analyysitodistuksessa ja/tai tuoteselosteessa kuvattujen eritelmien mukaisia

Lisätietoja on <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Takuulausumassa