PLH

La lignée cellulaire PLH est une lignée cellulaire lymphoblastoïde humaine transformée par le virus d'Epstein-Barr (EBV) et dérivée d'un patient atteint d'hyperplasie congénitale des surrénales (HCS) due à un déficit en stéroïde 21-hydroxylase (21-OHase). Ce trouble autosomique récessif, qui entrave la biosynthèse du cortisol, est fortement lié à des haplotypes HLA spécifiques, en particulier HLA-Bw47;DR7. La lignée PLH est homozygote pour cet haplotype et a été utilisée comme modèle génétique pour étudier les bases moléculaires du déficit en 21-OHase. Elle est particulièrement utile pour étudier les délétions génétiques affectant le gène du cytochrome P-450C21, qui est responsable de la 21-hydroxylation, une étape cruciale dans la production de cortisol. Des analyses moléculaires utilisant des sondes ADN ont confirmé que les cellules PLH présentent une délétion homozygote de l'un des deux gènes P-450C21, ce qui correspond à la perte de l'activité 21-hydroxylase observée chez les personnes affectées.

La lignée cellulaire PLH faisait partie du panel du Fourth Asia-Oceania Histocompatibility Workshop (4AOHW), qui visait à fournir un ensemble bien caractérisé de lignées cellulaires lymphoblastoïdes transformées par l'EBV et représentant divers allèles et haplotypes du CMH. Ces panels constituent des ressources essentielles pour les études d'histocompatibilité, le développement du typage HLA et la recherche en immunogénétique. La sélection de la PLH pour l'inclusion dans le 4AOHW reflète son génotype unique du CMH et son intérêt pour la maladie, contribuant à la fois à la normalisation de l'attribution des allèles HLA et aux études explorant l'architecture génétique des troubles liés à l'immunité.

37°C, 5%_CO2, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes basées sur la luminescence.

Pour s'assurer de l'absence de contamination bactérienne, fongique ou levurienne, les cultures cellulaires font l'objet d'inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placer les flacons dans de l'azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre -150 et -196 °C environ. Le stockage à -80 °C n'est acceptable qu'en tant qu'étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l'azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées sur glace sèche dans des emballages isolés et validés, avec suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d'environ -78 °C tout au long du transport. À la réception, inspecter immédiatement le conteneur et transférer sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous nous portons garants de la qualité et de la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours après l'expédition de nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d'analyse et/ou la fiche produit

Pour plus de détails, veuillez consulter notre <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default""> Déclaration de garantie