PLH

La línea celular PLH es una línea de células linfoblastoides humanas transformadas por el virus de Epstein-Barr (VEB), derivada de un paciente con hiperplasia suprarrenal congénita (HSC) debida a una deficiencia de la 21-hidroxilasa esteroidea (21-OHasa). Este trastorno autosómico recesivo, que altera la biosíntesis del cortisol, está estrechamente relacionado con haplotipos HLA específicos, en particular el HLA-Bw47;DR7. La línea PLH es homocigótica para este haplotipo y se ha utilizado como modelo genético para investigar la base molecular de la deficiencia de 21-OHasa. Resulta especialmente valiosa para estudiar las deleciones genéticas que afectan al gen del citocromo P-450C21, responsable de la 21-hidroxilación, un paso crucial en la producción de cortisol. Los análisis moleculares con sondas de ADN confirmaron que las células PLH presentan una deleción homocigótica de uno de los dos genes P-450C21, lo cual concuerda con la pérdida de actividad de la 21-hidroxilasa observada en los individuos afectados.

La línea celular PLH formó parte del panel del Cuarto Taller de Histocompatibilidad de Asia y Oceanía (4AOHW), cuyo objetivo era proporcionar un conjunto bien caracterizado de líneas celulares linfoblastoides transformadas por el VEB que representaran diversos alelos y haplotipos del MHC. Estos paneles sirven como recursos esenciales para estudios de histocompatibilidad, el desarrollo de la tipificación de HLA y la investigación en inmunogenética. La selección de PLH para su inclusión en el 4AOHW reflejó su genotipo único del MHC y su relevancia para la enfermedad, lo que contribuyó tanto a la estandarización de las asignaciones de alelos de HLA como a los estudios que exploran la arquitectura genética de los trastornos relacionados con el sistema inmunológico.

37 °C, 5 % de CO₂, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Se descarta la contaminación por micoplasmas mediante ensayos basados en PCR y métodos de detección de micoplasmas basados en luminiscencia.

Para garantizar que no haya contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, coloque los viales en nitrógeno líquido en fase de vapor a una temperatura de entre −150 y −196 °C, aproximadamente. El almacenamiento a −80 °C solo es aceptable como un paso intermedio breve antes de transferirlos al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares criopreservadas se envían en hielo seco, en un embalaje aislante validado que contiene suficiente refrigerante para mantener una temperatura de aproximadamente −78 °C durante todo el transporte. Al recibir el envío, revise el contenedor de inmediato y traslade los viales sin demora al lugar de almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y la viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante 60 días a partir de la fecha de envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales cumplen con las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o la Ficha del Producto.

Para obtener más detalles, consulte nuestra Declaración de garantía.