PLH

A linhagem celular PLH é uma linhagem de células linfoblastoides humanas transformadas pelo vírus de Epstein-Barr (EBV), derivada de um paciente com hiperplasia adrenal congênita (HAC) devido à deficiência da 21-hidroxilase de esteróides (21-OHase). Essa doença autossômica recessiva, que prejudica a biossíntese do cortisol, está fortemente associada a haplótipos específicos do HLA, particularmente o HLA-Bw47;DR7. A linha PLH é homozigótica para esse haplótipo e tem sido utilizada como modelo genético para investigar a base molecular da deficiência de 21-OHase. Ela é especialmente valiosa no estudo de deleções genéticas que afetam o gene do citocromo P-450C21, responsável pela 21-hidroxilação, uma etapa crucial na produção de cortisol. Análises moleculares utilizando sondas de DNA confirmaram que as células PLH apresentam uma deleção homozigótica de um dos dois genes P-450C21, o que é consistente com a perda da atividade da 21-hidroxilase observada em indivíduos afetados.

A linhagem celular PLH fez parte do painel do Quarto Workshop de Histocompatibilidade da Ásia-Oceania (4AOHW), que teve como objetivo fornecer um conjunto bem caracterizado de linhagens de células linfoblastoides transformadas pelo EBV, representando diversos alelos e haplótipos do MHC. Esses painéis servem como recursos essenciais para estudos de histocompatibilidade, desenvolvimento de tipagem de HLA e pesquisa em imunogenética. A seleção da PLH para inclusão no 4AOHW refletiu seu genótipo MHC único e sua relevância para a doença, contribuindo tanto para a padronização das atribuições de alelos de HLA quanto para estudos que exploram a arquitetura genética de doenças relacionadas ao sistema imunológico.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.