PLH

La linea cellulare PLH è una linea cellulare linfoblastoide umana trasformata dal virus di Epstein-Barr (EBV), derivata da un paziente con iperplasia surrenale congenita (CAH) dovuta a un deficit di steroide 21-idrossilasi (21-OHase). Questo disturbo autosomico recessivo, che compromette la biosintesi del cortisolo, è fortemente legato a specifici aplotipi HLA, in particolare HLA-Bw47;DR7. La linea PLH è omozigote per questo aplotipo ed è stata utilizzata come modello genetico per studiare le basi molecolari del deficit di 21-OHasi. È particolarmente utile per studiare le delezioni geniche che interessano il gene del citocromo P-450C21, responsabile della 21-idrossilazione, una fase cruciale nella produzione di cortisolo. Le analisi molecolari condotte con sonde di DNA hanno confermato che le cellule PLH presentano una delezione omozigote di uno dei due geni P-450C21, coerentemente con la perdita dell'attività della 21-idrossilasi osservata negli individui affetti.

La linea cellulare PLH faceva parte del pannello del Fourth Asia-Oceania Histocompatibility Workshop (4AOHW), che mirava a fornire un insieme ben caratterizzato di linee cellulari linfoblastoidi trasformate da EBV che rappresentassero diversi alleli e aplotipi MHC. Questi pannelli servono come risorse essenziali per gli studi di istocompatibilità, lo sviluppo della tipizzazione HLA e la ricerca immunogenetica. La scelta della PLH per l'inclusione nel 4AOHW riflette il suo genotipo MHC unico e la sua rilevanza per le malattie, contribuendo sia alla standardizzazione dell'assegnazione degli alleli HLA sia agli studi che esplorano l'architettura genetica dei disturbi immunocorrelati.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia