PLH

A linha celular PLH é uma linha celular linfoblastóide humana transformada pelo vírus Epstein-Barr (EBV), derivada de um doente com hiperplasia congénita da suprarrenal (CAH) devido a uma deficiência de esteroide 21-hidroxilase (21-OHase). Esta doença autossómica recessiva, que prejudica a biossíntese do cortisol, está fortemente ligada a haplótipos HLA específicos, particularmente HLA-Bw47;DR7. A linha PLH é homozigótica para este haplótipo e tem sido utilizada como modelo genético para investigar a base molecular da deficiência de 21-OHase. É especialmente valiosa no estudo de deleções genéticas que afectam o gene do citocromo P-450C21, que é responsável pela 21-hidroxilação, um passo crucial na produção de cortisol. As análises moleculares utilizando sondas de ADN confirmaram que as células PLH apresentam uma deleção homozigótica de um dos dois genes P-450C21, consistente com a perda da atividade da 21-hidroxilase observada nos indivíduos afectados.

A linha celular PLH fazia parte do painel do Quarto Workshop de Histocompatibilidade Ásia-Oceânia (4AOHW), que tinha como objetivo fornecer um conjunto bem caracterizado de linhas celulares linfoblastóides transformadas por EBV, representando diversos alelos e haplótipos do MHC. Estes painéis servem como recursos essenciais para estudos de histocompatibilidade, desenvolvimento de tipagem HLA e investigação imunogenética. A seleção de PLH para inclusão no 4AOHW reflectiu o seu genótipo MHC único e a relevância da doença, contribuindo para a normalização das atribuições de alelos HLA e para estudos que exploram a arquitetura genética de doenças relacionadas com o sistema imunitário.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia