PLH

Buněčná linie PLH je lidská lymfoblastoidní buněčná linie transformovaná virem Epsteina-Barrové (EBV) a získaná od pacienta s vrozenou hyperplazií nadledvin (CAH) v důsledku deficitu steroidní 21-hydroxylázy (21-OHázy). Tato autozomálně recesivní porucha, která narušuje biosyntézu kortizolu, je silně spojena se specifickými haplotypy HLA, zejména HLA-Bw47;DR7. Linie PLH je homozygotní pro tento haplotyp a byla použita jako genetický model pro zkoumání molekulární podstaty deficitu 21-OHázy. Je obzvláště cenná při studiu genových delecí postihujících gen cytochromu P-450C21, který je zodpovědný za 21-hydroxylaci, což je klíčový krok při produkci kortizolu. Molekulární analýzy pomocí DNA sond potvrdily, že PLH buňky vykazují homozygotní deleci jednoho ze dvou genů P-450C21, což odpovídá ztrátě aktivity 21-hydroxylázy pozorované u postižených jedinců.

Buněčná linie PLH byla součástí panelu 4AOHW (Fourth Asia-Oceania Histocompatibility Workshop), jehož cílem bylo poskytnout dobře charakterizovaný soubor lymfoblastoidních buněčných linií transformovaných EBV, které reprezentují různé alely a haplotypy MHC. Tyto panely slouží jako základní zdroje pro studie histokompatibility, vývoj typizace HLA a imunogenetický výzkum. Výběr PLH pro zařazení do 4AOHW odráží jeho jedinečný genotyp MHC a význam pro onemocnění, což přispívá jak ke standardizaci přiřazení alel HLA, tak ke studiím zkoumajícím genetickou architekturu poruch souvisejících s imunitou.

37 °C, 5 %_CO2, zvlhčená atmosféra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

Ve společnosti Cytion si stojíme za kvalitou a životaschopností našich produktů. Zaručujeme, že naše buňky budou životaschopné na začátku kultivace po dobu 60 dnů po odeslání z našich zařízení. Zaručujeme, že všechny materiály odpovídají specifikacím popsaným v certifikátu analýzy a/nebo v produktovém listu

Úplné informace naleznete v našem <a href=""/Kdo-jsme/Záruka/"" hreflang=""x-default"">Záručním prohlášení