PLH

La lignée cellulaire PLH est une lignée de cellules lymphoblastiques humaines transformées par le virus d’Epstein-Barr (VEB), dérivée d’un patient atteint d’hyperplasie congénitale des surrénales (HCS) due à un déficit en 21-hydroxylase stéroïdienne (21-OHase). Cette maladie autosomique récessive, qui altère la biosynthèse du cortisol, est étroitement liée à des haplotypes HLA spécifiques, notamment HLA-Bw47;DR7. La lignée PLH est homozygote pour cet haplotype et a été utilisée comme modèle génétique pour étudier les mécanismes moléculaires du déficit en 21-OHase. Elle s’avère particulièrement utile pour l’étude des délétions génétiques affectant le gène du cytochrome P-450C21, responsable de la 21-hydroxylation, une étape cruciale de la production de cortisol. Des analyses moléculaires à l’aide de sondes d’ADN ont confirmé que les cellules PLH présentent une délétion homozygote de l’un des deux gènes P-450C21, ce qui concorde avec la perte d’activité de la 21-hydroxylase observée chez les personnes atteintes.

La lignée cellulaire PLH faisait partie du panel du quatrième atelier sur l’histocompatibilité en Asie-Océanie (4AOHW), qui visait à fournir un ensemble bien caractérisé de lignées cellulaires lymphoblastiques transformées par l’EBV représentant divers allèles et haplotypes du CMH. Ces panels constituent des ressources essentielles pour les études d’histocompatibilité, le développement du typage HLA et la recherche en immunogénétique. Le choix de la lignée PLH pour faire partie du 4AOHW reflétait son génotype du CMH unique et sa pertinence sur le plan clinique, contribuant ainsi à la fois à la normalisation de l’attribution des allèles HLA et aux études explorant l’architecture génétique des troubles liés au système immunitaire.

37 °C, 5 % _de CO_₂, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.

Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.

Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.