PLH

Die PLH-Zelllinie ist eine durch das Epstein-Barr-Virus (EBV) transformierte humane lymphoblastoide Zelllinie, die von einem Patienten mit kongenitaler adrenaler Hyperplasie (CAH) aufgrund eines Steroid-21-Hydroxylase-Mangels (21-OHase) stammt. Diese autosomal rezessiv vererbte Störung, die die Cortisol-Biosynthese beeinträchtigt, ist eng mit bestimmten HLA-Haplotypen verbunden, insbesondere mit HLA-Bw47;DR7. Die PLH-Linie ist homozygot für diesen Haplotyp und wurde als genetisches Modell verwendet, um die molekularen Grundlagen des 21-OHase-Mangels zu untersuchen. Sie ist besonders wertvoll bei der Untersuchung von Gendeletionen, die das Cytochrom P-450C21-Gen betreffen, das für die 21-Hydroxylierung, einen entscheidenden Schritt bei der Cortisolproduktion, verantwortlich ist. Molekulare Analysen mit DNA-Sonden bestätigten, dass PLH-Zellen eine homozygote Deletion eines der beiden P-450C21-Gene aufweisen, was mit dem bei den betroffenen Personen beobachteten Verlust der 21-Hydroxylase-Aktivität übereinstimmt.

Die PLH-Zelllinie war Teil des Fourth Asia-Oceania Histocompatibility Workshop (4AOHW) Panels, dessen Ziel es war, einen gut charakterisierten Satz von EBV-transformierten lymphoblastoiden Zelllinien bereitzustellen, die verschiedene MHC-Allele und Haplotypen repräsentieren. Diese Panels dienen als wichtige Ressourcen für Histokompatibilitätsstudien, die Entwicklung von HLA-Typisierungen und die immungenetische Forschung. Die Auswahl von PLH für die Aufnahme in das 4AOHW spiegelt seinen einzigartigen MHC-Genotyp und seine Krankheitsrelevanz wider und trägt sowohl zur Standardisierung der HLA-Allelzuordnung als auch zu Studien bei, die die genetische Architektur immunbezogener Erkrankungen untersuchen.

37°C, 5%_CO2, befeuchtete Atmosphäre.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

Bei Cytion stehen wir hinter der Qualität und Lebensfähigkeit unserer Produkte. Wir garantieren, dass unsere Zellen zu Beginn der Kultur für 60 Tage nach dem Versand aus unseren Einrichtungen lebensfähig sind. Wir versichern, dass alle Materialien mit den im Analysezertifikat und/oder Produktblatt beschriebenen Spezifikationen übereinstimmen

Ausführliche Informationen finden Sie in unserer <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantieerklärung