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Cellule A427
Tessuto
Polmone
Malattia
Carcinoma
Sinonimi
A-427, A427N

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Cellule A427

Cell line · Codice prodotto 300111

Le cellule A427 provengono dal tessuto polmonare, in particolare da un carcinoma, presentano una morfologia epiteliale e crescono in modo aderente. Le cellule A427 hanno un tempo di raddoppio di circa...

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01Informazioni generali

Descrizione

Le cellule A427 provengono da tessuto polmonare, nello specifico da un carcinoma, presentano una morfologia epiteliale e crescono in modo aderente. Le cellule A427 hanno un tempo di raddoppiamento di circa 28 ore in terreno RPMI 1640 integrato con il 10% di siero fetale bovino (FBS).

In terreno ACL-3, il tempo di raddoppiamento è leggermente più lungo, fino a 38 ore, mentre in ACL-3 integrato con sieroalbumina bovina (BSA) raggiunge le 42 ore. Queste variazioni nel tempo di raddoppiamento forniscono preziose indicazioni sul comportamento delle cellule in diverse condizioni sperimentali.

Al passaggio 60, le cellule A427 presentano un cariotipo da ipotriploide a ipertriploide. Ciò significa che le cellule possiedono cromosomi anomali, tra cui dicentrici, minuti e un grande marcatore subtelocentrico. Tali anomalie cariotipiche sono spesso associate alle cellule tumorali e contribuiscono alle caratteristiche uniche di questa linea cellulare. Le cellule A427 presentano proprietà tumorigeniche che consentono loro di formare tumori quando vengono iniettate in topi nudi.

Questi tumori assomigliano all'adenocarcinoma indifferenziato, sottolineando ulteriormente l'importanza di questa linea cellulare nello studio del cancro del polmone e della sua progressione. Grazie alle sue caratteristiche eccezionali, le cellule A427 trovano utilità in diverse applicazioni, in particolare nella ricerca sul cancro. La loro morfologia epiteliale e l'origine polmonare le rendono un modello ideale per lo studio del cancro del polmone e delle malattie correlate. Inoltre, le cellule A427 si prestano bene alle tecniche di coltura cellulare 3D, fornendo un ambiente più fisiologicamente rilevante per esplorare il comportamento delle cellule tumorali polmonari.

Tessuto
Polmone
Malattia
Carcinoma
Sinonimi
  • A-427
  • A427N

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Maschio
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio
Tumorigenico
Sì, in topi nudi. Forma un tumore indifferenziato suggestivo di adenocarcinoma.
Cariotipo
P60) da ipotriploide a ipertriploide con anomalie che includono dicentri, minuti e grandi marcatori subtelocentrici

04Identificatori

Riferimento bibliografico
A427 (numero di catalogo Cytion 300111)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1055

05Espressione e suscettibilità

Espressione proteica
P53 positivo

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamina, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (articolo Cytion numero 820100a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS e l'1% di NEAA
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
1 x 104 cellule/cm2 darà luogo a un monostrato confluente entro 3 giorni.
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Recupero post-scongelamento
Dopo lo scongelamento, piastrare le cellule a 4 x 104 cellule/cm2 e lasciare che le cellule si riprendano dal processo di congelamento e aderiscano per almeno 24 ore.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
52 anni
Etnia
Caucasico