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Cellule epatiche Chang (HeLa)
Tessuto
Fegato
Malattia
Adenocarcinoma
Sinonimi
Chang-liver, Chang Cells, Chang, CHL

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Cellule epatiche Chang (HeLa)

Cell line · Codice prodotto 300139

La linea cellulare epatica Chang, che in origine si riteneva derivasse da tessuto epatico umano normale, è stata oggetto di una significativa riclassificazione a seguito di studi approfonditi...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare Chang Liver, originariamente ritenuta derivata da tessuto epatico umano normale, ha subito una significativa riclassificazione a seguito di un'avanzata profilazione genetica. Le tecniche di profilazione del DNA con PCR STR hanno dimostrato che la linea cellulare Chang Liver è indistinguibile dalla linea cellulare HeLa, suggerendo che non è derivata da cellule epatocitarie come si pensava in precedenza, ma piuttosto dovrebbe essere considerata un derivato HeLa. Questa rivelazione ha importanti implicazioni per i ricercatori che utilizzano questa linea cellulare, sottolineando la necessità di un'attenta interpretazione dei risultati sperimentali derivanti dal suo utilizzo.

Le cellule HeLa, originariamente prelevate da Henrietta Lacks, una donna di colore, all'inizio degli anni '50, sono note per la loro robusta crescita e stabilità genetica in vitro, caratteristiche probabilmente condivise dalla linea cellulare Chang Liver, data la sua somiglianza genetica. Questo contesto rende necessario che gli studi che impiegano la linea cellulare Chang Liver nella ricerca relativa alla funzione o alle malattie del fegato debbano essere rivalutati o confermati con altri modelli specifici per gli epatociti. L'errata identificazione evidenzia anche problemi più ampi nelle pratiche di coltura cellulare, tra cui la contaminazione incrociata e l'etichettatura errata, sottolineando l'importanza di un'autenticazione regolare delle linee cellulari utilizzate in ambito di ricerca.

Tessuto
Fegato
Malattia
Adenocarcinoma
Sinonimi
  • Chang-liver
  • Chang Cells
  • Chang
  • CHL

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio
Tumorigenico
Sì, nei criceti siriani

04Identificatori

Riferimento bibliografico
Fegato di Chang (HeLa) (catalogo Cytion numero 300139)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0238

05Espressione e suscettibilità

Isoenzimi
G6PD, A
Virus
Testato MHV (virus dell'epatite dei topi) negativo
Suscettibilità ai virus
Poliovirus 1, 2, 3, adenovirus 3, stomatite vescicolare (Indiana)
Trascriptasi inversa
Negativo
Prodotti
Cheratina

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamina, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (articolo Cytion numero 820100a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS e l'1% di NEAA
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
1 x 104 cellule/cm2 produrrà uno strato confluente in circa 4 giorni
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Recupero post-scongelamento
Dopo lo scongelamento, piastrare le cellule a 5 x 104 cellule/cm2 e lasciare che le cellule si riprendano dal processo di congelamento e aderiscano per almeno 24 ore.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
30 anni