Pāriet uz saturu
MEG-01
Audums
Kaulu smadzenes
Slimība
Hroniska mieloīdo leikēmija
Sinonīmi
Meg-01, MEG01, Meg01

Dokumenti

MEG-01

Cell line · Preces numurs 300482

The MEG-01 cell line is a human megakaryoblast cell line established from the bone marrow of a 55-year-old male patient who was in the megakaryoblastic cr...

€430.00bez nodokļa un piegādes izmaksām

Pielāgošana / Ieteikumi

Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

MEG-01 šūnu līnija ir cilvēka megakarioblastu šūnu līnija, kas iegūta no 55 gadus veca vīrieša kaulu smadzenēm, kurš bija hroniskas mielogēnās leikēmijas (HML) megakarioblastiskās krīzes fāzē. Šī šūnu līnija tika izstrādāta 1983. gadā Nagojas Universitātes Medicīnas skolā, Japānā. Pacientam, no kura tika iegūta MEG-01, bija pozitīva Filadelfijas hromosoma (Ph1), kas ir KML pazīme. MEG-01 šūnām ir hiperdiploīdais kariotips ar modālo hromosomu skaitu no 56 līdz 58, kas konsekventi liecina par Ph1 hromosomas klātbūtni, kas ir t(9;22) hromosomu translokācijas rezultāts.

MEG-01 šūnām piemīt jauktas augšanas īpašības, kultūrā tām piemīt gan adhēzijas, gan suspensijas īpašības. Šīs šūnas ekspresē vairākus megakariocītu līnijai raksturīgus marķierus un antigēnus, tostarp CD41, CD61 un CDw14. Tās ir pozitīvas arī attiecībā uz citoplazmas VIII faktoru, virsmas GPIIb/IIIa un dažādām enzīmu aktivitātēm, piemēram, periodisko skābes-Šifa (PAS) reakciju, alfa naftilacetāta esterāzi un skābo fosfatāzi. Interesanti, ka MEG-01 šūnām ir negatīvs mieloperoksidāzes, alfa naftilbutirāta esterāzes, naftol AS-D hloracetāta esterāzes un sārmainās fosfatāzes noteikšanas rezultāts, kas palīdz tās atšķirt no citām mieloīdām šūnām.

MEG-01 ir bijis vērtīgs modelis cilvēka megakariopoēzes, trombocītu veidošanās un megakariocītu līnijai raksturīgo olbaltumvielu, piemēram, trombocītu izcelsmes augšanas faktora (PDGF) un tādu glikoproteīnu kā GPIIb/IIIa, biosintēzes pētījumiem. Pateicoties labi raksturotajam ģenētiskajam fonam un spējai ekspresēt galvenos megakariocītu marķierus, MEG-01 kalpo kā nozīmīgs līdzeklis leikēmijas un trombocītu biogēnozes mehānismu izpētei, lai gan tas nav paredzēts terapeitiskiem vai in vivo lietojumiem.

Audums
Kaulu smadzenes
Slimība
Hroniska mieloīdo leikēmija
Sinonīmi
  • Meg-01
  • MEG01
  • Meg01

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Sekss
Vīrietis
Augšanas īpašības
Adhēzija un suspensija
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Mioblastiem līdzīgs
Šūnu tips
Megakarioblasts

04Identifikatori

Atsauce
MEG-01 (Cytion kataloga numurs 300482)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
CVCL_0425

05Pazīmes un uzņēmība

Antigēna ekspresija
CD41 +, CD61 +, CDw14 +

06Apstrāde un audzēšana

Barotne
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabils glutamīns, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion izstrādājuma numurs 820700a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Savāc suspensijas šūnas 15 ml mēģenē un saudzīgi izmazgā pielipušās šūnas ar PBS bez kalcija un magnija (T25 kolbām izmanto 3-5 ml, bet T75 kolbām - 5-10 ml). Uzklājiet Accutase (1-2 ml T25 kolbām, 2,5 ml T75 kolbām), nodrošinot pilnīgu šūnu slāņa pārklājumu. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 10 minūtes. Pēc inkubācijas apvienot un centrifugēt gan suspensiju, gan pielipušās šūnas. Pēc centrifugēšanas uzmanīgi resuspendēt šūnu granulas un pārvietot šūnu suspensiju jaunās kolbās ar svaigu barotni.
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

08Ziedotājs

Donora vecums
55 gadi
Etniskā piederība
Austrumāzijas