Przejdź do treści
Komórki NCH421K
Chusteczka
Mózg
Choroba
Glejak wielopostaciowy
Synonimy
NCH421k

Dokumenty

Komórki NCH421K

Cell line · Numer produktu 300118

NCH421K to ludzka linia komórkowa o cechach komórek macierzystych glejaka wielopostaciowego, wyhodowana z pierwotnego guza glejaka wielopostaciowego pobranego od dorosłego pacjenta. Linia ta należy do...

€800.00bez podatku i kosztów wysyłki
Niski stan magazynowy
Lot
Polecane (najświeższa partia)
  • CoA
1

01Informacje ogólne

Opis

NCH421K to ludzka linia komórkowa o charakterze podobnym do komórek macierzystych glejaka wielopostaciowego, wyhodowana z pierwotnego guza glejaka wielopostaciowego pobranego od dorosłego pacjenta. Linia ta należy do klasy komórek inicjujących nowotwór, które zachowują kluczowe cechy komórek macierzystych układu nerwowego, w tym zdolność do samoodnawiania się, wielopotencjalność oraz zdolność do odtwarzania heterogenności nowotworu. Komórki NCH421K są zazwyczaj hodowane w warunkach bez surowicy i rosną jako nieprzylegające neurosfery, co jest cechą charakterystyczną hodowli komórek glejaka o charakterze komórek macierzystych. Ekspresja kanonicznych markerów komórek macierzystych, takich jak CD133 i nestina, potwierdza ich klasyfikację jako modelu komórek macierzystych glejaka wielopostaciowego.

Wzrost i przeżywalność komórek NCH421K są silnie uzależnione od podstawowego czynnika wzrostu fibroblastów (bFGF), który sprzyja proliferacji i utrzymaniu cech komórek macierzystych, podczas gdy czynnik wzrostu naskórka (EGF) ma minimalny wpływ na ich ekspansję. Komórki te utrzymują wysoką ekspresję markerów komórek macierzystych pod wpływem stymulacji bFGF i wykazują zdolność do tworzenia nowotworów in vivo, co podkreśla ich potencjał nowotworowy. Ze względu na te właściwości NCH421K jest szeroko stosowana w badaniach nad biologią komórek macierzystych glejaka wielopostaciowego, opornością na leczenie, strategiami różnicowania oraz w ocenie terapii celowanych mających na celu wyeliminowanie populacji komórek inicjujących nowotwór.

Linia komórkowa została założona przez Christel Herold-Mende z tkanki glejaka wielopostaciowego.

Chusteczka
Mózg
Choroba
Glejak wielopostaciowy
Synonimy
  • NCH421k

02Klasyfikacja

Organizm
Człowiek
Seks
Mężczyzna
Poziom bezpieczeństwa biologicznego
1

03Cechy charakterystyczne

Nowotworotwórczy
Tak
Czas podwojenia
35 do 40 godzin

04Identyfikatory

Źródło
NCH421K (numer katalogowy Cytion 300118)
Numer identyfikacji podatkowej NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_x910

05Postępowanie i hodowla

Pożywka hodowlana
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/l glukozy, w: 2,5 mM L-glutaminy, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM pirogronianu sodu, w: 1,2 g/l NaHCO3 (numer artykułu Cytion 820400a)
Atmosfera inkubacyjna

37°C, 5%CO2, nawilżona atmosfera.

Suplementy
Do pożywki należy dodać 5 mg/l heparyny, 20 ng/ml bFGF, 20 mikrogramów/l EGF, 5 mg/l insuliny, 100 mg/l transferyny, 5,2 mikrograma/l selenitu sodu, 6,3 mikrograma/l progesteronu, 161,1 mikrograma/l putrescyny, 50 mg/l hydrokortyzonu
Hodowla komórek w subkulturze
W przypadku subkulturowania kultur sferoidalnych, należy rozpocząć od mechanicznej dysocjacji sferoidów poprzez pipetowanie w górę i w dół od 5 do 10 razy przy użyciu pipety Eppendorf z końcówkami filtrującymi 1000 μl. Następnie odwirować mieszaninę z prędkością 300 g przez 5 minut w temperaturze pokojowej w celu osuszenia komórek. Odrzucić supernatant i ponownie zawiesić osad komórek w świeżym podłożu hodowlanym. Na koniec przenieś ponownie zawieszone komórki do nowych naczyń hodowlanych, aby promować dalsze tworzenie sferoidów. Takie podejście zapewnia skuteczny rozpad sferoid i przygotowuje je do dalszego wzrostu w nowym środowisku
Gęstość wysiewu
1 do 2 x 105 komórek/ml
Odnawianie płynów
2 do 3 razy w tygodniu
Powrót do stanu sprzed rozmrożenia
Należy pozwolić komórkom na regenerację po procesie zamrażania przez co najmniej 24 do 48 godzin.
Rozmrażanie i hodowla
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kontrola jakości i kriokonserwacja

Bezpłodność

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

Pożywka do zamrażania
Jako pożywki do kriokonserwacji używamy 50% pożywki podstawowej + 40% FBS + 10% DMSO lub CM-1 (numer katalogowy Cytion 800100), która zawiera zoptymalizowane osmoprotektanty i stabilizatory metaboliczne w celu zwiększenia regeneracji i zmniejszenia stresu wywołanego kriokonserwacją.
Warunki przechowywania

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Warunki wysyłki

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

07Darczyńca

Wiek dawcy
66 lat
Pochodzenie etniczne
Kaukaski