Mine otse sisu juurde
NCH421K rakud
Kude
Aju
Haigus
Glioblastoom
Sünonüümid
NCH421k

Dokumendid

NCH421K rakud

Cell line · Toote number 300118

NCH421K on inimese glioblastoomi tüvirakkudele sarnane rakuliin, mis on saadud täiskasvanud patsiendilt võetud esmasest glioblastoomi kasvajast. See rakuliin kuulub ...

€800.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Varud on väikesed
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
  • CoA
1

01Üldine teave

Kirjeldus

NCH421K on inimese glioblastoomi tüvirakkudele sarnane rakuliin, mis on saadud täiskasvanud patsiendilt võetud esmasest glioblastoomi kasvajast. See rakuliin kuulub kasvajate algatajate rakkude klassi, mis säilitavad närvirakkude peamised omadused, sealhulgas eneseuuenemise võime, multipotentsuse ja võime taastada kasvaja heterogeensust. NCH421K rakke kasvatatakse tavaliselt seerumivabades tingimustes ja need kasvavad mittekinnitunud neurosfääridena, mis on tüvirakkudele sarnaste glioomikultuuride tunnuseks. Need ekspresseerivad kanonilisi tüvirakkude markereid, nagu CD133 ja nestin, mis toetab nende klassifitseerimist glioblastoomi tüvirakkudele sarnase mudelina.

NCH421K kasv ja ellujäämine sõltuvad tugevalt põhilisest fibroblastide kasvufaktorist (bFGF), mis soodustab proliferatsiooni ja tüvirakkudele omaste omaduste säilitamist, samas kui epidermaalne kasvufaktor (EGF) avaldab selle laienemisele minimaalset mõju. Rakud säilitavad bFGF-stimulatsiooni all tüvirakkude markerite kõrge ekspressiooni ja näitavad võimet moodustada kasvajaid in vivo, rõhutades nende kasvajate tekitamise potentsiaali. Nende omaduste tõttu kasutatakse NCH421K laialdaselt glioblastoomi tüvirakkude bioloogia, raviresistentsuse, diferentseerumisstrateegiate uuringutes ning kasvajate algatajate rakupopulatsioonide hävitamisele suunatud sihtotstarbeliste ravimeetodite hindamisel.

Selle rakuliini lõi Christel Herold-Mende glioblastoomi koest.

Kude
Aju
Haigus
Glioblastoom
Sünonüümid
  • NCH421k

02Klassifikatsioon

Organism
Inimene
Sugu
Mees
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Tuumorigeenne
Jah
Kahekordistumisaeg
35-40 tundi

04Tunnused

Viide
NCH421K (Cytioni katalooginumber 300118)
NCBI maksukood
9606
Cellosaurus
CVCL_x910

05Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L glükoosi, w: 2,5 mM L-glutamiini, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM naatriumpüruvaati, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytioni artikli number 820400a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Lisage kasvukeskkonnale 5 mg/l hepariini, 20 ng/ml bFGF-i, 20 mikrogrammi/l EGF-i, 5 mg/l insuliini, 100 mg/l transferriini, 5,2 mikrogrammi/l na-seleniiti, 6,3 mikrogrammi/l progesterooni, 161,1 mikrogrammi/l putreskiini, 50 mg/l hüdrokortisooni
Kultuuri edasikasvatamine
Sferoidikultuuride subkultuurimiseks alustage sferoidide mehaanilise dissotsiatsiooniga, kasutades Eppendorfi pipetti, millel on 1000 μl filtriotsikud, 5-10 korda üles-alla pipetiga. Pärast seda tsentrifuugige segu 300 g juures 5 minutit toatemperatuuril, et rakud pelleteerida. Visake supernatant ära ja resuspenseerige rakupellet värskes kultuurkeskkonnas. Lõpuks kandke resuspendeeritud rakud uutesse kasvatusanumatesse, et soodustada edasist sferoidide moodustumist. Selline lähenemine tagab sferoidide tõhusa lagunemise ja valmistab neid ette jätkuvaks kasvuks uues keskkonnas
Külvitihedus
1 kuni 2 x 105 rakku/ml
Vedeliku vahetus
2 kuni 3 korda nädalas
Taastumine pärast sulamist
Laske rakkudel külmutusprotsessist taastuda vähemalt 24-48 tundi.
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüokonserveerimissöötmena kasutame 50% põhikeskkonda + 40% FBS + 10% DMSO ehk CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüoostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

07Annetaja

Doonori vanus
66 aastat
Etniline kuuluvus
Kaukaasia