Přejít na obsah
Buňky NCH421K
Tkáň
Mozek
Nemoc
Glioblastom
Synonyma
NCH421k

Dokumenty

Buňky NCH421K

Cell line · Číslo výrobku 300118

NCH421K je lidská buněčná linie podobná kmenovým buňkám glioblastomu, odvozená z primárního nádoru glioblastomu odebraného u dospělého pacienta. Tato buněčná linie patří k...

€800.00bez DPH a poštovného
Nízký stav zásob
Lot
Doporučeno (nejčerstvější šarže)
  • CoA
1

01Obecné informace

Popis

NCH421K je lidská buněčná linie podobná kmenovým buňkám glioblastomu, odvozená z primárního glioblastomu odebraného dospělému pacientovi. Tato buněčná linie patří do skupiny nádorových iniciujících buněk, které si zachovávají klíčové vlastnosti nervových kmenových buněk, včetně schopnosti sebeobnovy, multipotence a schopnosti reprodukovat nádorovou heterogenitu. Buňky NCH421K se obvykle kultivují v bezsérumových podmínkách a rostou jako neadhezivní neurosféry, což je charakteristický znak kmenových kultur gliomů. Exprimují kanonické markery kmenových buněk, jako jsou CD133 a nestin, což podporuje jejich klasifikaci jako modelu kmenových buněk glioblastomu.

NCH421K vykazuje růst a přežití, které jsou silně závislé na bazickém fibroblastovém růstovém faktoru (bFGF), který podporuje proliferaci a udržení kmenových charakteristik, zatímco epidermální růstový faktor (EGF) má na jeho expanzi minimální vliv. Buňky si při stimulaci bFGF udržují vysokou expresi markerů kmenových buněk a vykazují schopnost tvořit nádory in vivo, což podtrhuje jejich tumorigenní potenciál. Díky těmto vlastnostem je NCH421K široce využívána ve studiích biologie kmenových buněk glioblastomu, terapeutické rezistence, diferenciačních strategií a hodnocení cílených léčebných postupů zaměřených na eradikaci populací buněk iniciujících nádor.

Tuto buněčnou linii založila Christel Herold-Mende z tkáně glioblastomu.

Tkáň
Mozek
Nemoc
Glioblastom
Synonyma
  • NCH421k

02Klasifikace

Organismus
Člověk
Sex
Muž
Úroveň biologické bezpečnosti
1

03Charakteristika

Tumorogenní
Ano
Doba zdvojnásobení
35 až 40 hodin

04Identifikátory

Citace
NCH421K (katalogové číslo Cytion 300118)
Daňové identifikační číslo NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_x910

05Manipulace a chov

Pěstovací médium
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/l glukózy, w: 2,5 mM L-Glutaminu, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM pyruvátu sodného, w: 1,2 g/l NaHCO3 (číslo výrobku Cytion 820400a)
Inkubační atmosféra

37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplňky stravy
Do média přidejte 5 mg/l heparinu, 20 ng/ml bFGF, 20 mikrogramů/l EGF, 5 mg/l inzulínu, 100 mg/l transferinu, 5,2 mikrogramu/l selenitu sodného, 6,3 mikrogramu/l progesteronu, 161,1 mikrogramu/l putrescinu a 50 mg/l hydrokortizonu
Subkultivace
Při subkultivaci sféroidních kultur začněte mechanickou disociací sféroidů pipetováním 5 až 10krát nahoru a dolů pomocí pipety Eppendorf s filtračními špičkami o objemu 1000 μl. Poté směs odstřeďte při 300 g po dobu 5 minut při pokojové teplotě, aby se buňky peletovaly. Supernatant zlikvidujte a buněčnou peletu znovu rozpusťte v čerstvém kultivačním médiu. Nakonec přeneste resuspendované buňky do nových kultivačních nádob, abyste podpořili další tvorbu sféroidů. Tento postup zajišťuje účinné rozdělení sféroidů a připravuje je na další růst v novém prostředí
Hustota výsevu
1 až 2 x 105 buněk/ml
Obnova tekutin
2 až 3krát týdně
Zotavení po rozmrazení
Nechte buňky po zmrazení alespoň 24 až 48 hodin zotavit.
Rozmrazování a kultivace
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kontrola kvality a kryokonzervace

Sterilita

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Mrazicí médium
Jako kryokonzervační médium používáme 50% základní médium + 40% FBS + 10% DMSO nebo CM-1 (katalogové číslo Cytion 800100), které obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory pro zlepšení regenerace a snížení stresu vyvolaného kryo.
Podmínky skladování

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Dopravní podmínky

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

07Dárce

Věk dárce
66 let
Etnická příslušnost
Kavkazský